Effek van temperatuurvariasie op selkultuur
Temperatuur is 'n belangrike parameter in selkultuur omdat dit die reproduceerbaarheid van resultate beïnvloed. Temperatuurveranderinge bo of onder 37°C het 'n baie beduidende effek op die selgroeikinetika van soogdierselle, soortgelyk aan dié van bakteriese selle. Veranderinge in geen-ekspressie en modifikasies in sellulêre struktuur, selsiklusprogressie, mRNA-stabiliteit kan na een uur by 32°C in soogdierselle opgespoor word. Benewens die direkte invloed op selgroei, beïnvloed temperatuurveranderinge ook die pH van die media, aangesien die oplosbaarheid van CO2 die pH verander (pH neem toe by laer temperature). Gekweekte soogdierselle kan beduidende temperatuurdalings verdra. Hulle kan vir 'n paar dae by 4°C gestoor word en kan vries tot -196°C verdra (met behulp van gepaste toestande). Hulle kan egter nie temperature bo ongeveer 2°C bo normaal vir meer as 'n paar uur verdra nie en sal vinnig by 40°C en hoër sterf. Om maksimum reproduceerbaarheid van resultate te verseker, selfs al oorleef die selle, moet sorg gedra word om die temperatuur so konstant as moontlik te handhaaf tydens die inkubasie en hantering van die selle buite die inkubator.
Redes vir temperatuurvariasies binne die broeikas
Jy sal opgemerk het dat wanneer die broeikasdeur oopgemaak word, die temperatuur vinnig daal tot die ingestelde waarde van 37 °C. Oor die algemeen sal die temperatuur binne 'n paar minute herstel nadat die deur toegemaak is. Trouens, statiese kulture benodig tyd om te herstel tot die ingestelde temperatuur in die broeikas. 'n Aantal faktore kan die tyd beïnvloed wat dit neem vir 'n selkultuur om temperatuur te herwin na behandeling buite die broeikas.Hierdie faktore sluit in:
- ▶die tydsduur wat die selle buite die broeikas was
- ▶die tipe fles waarin die selle gekweek word (geometrie beïnvloed hitte-oordrag)
- ▶Aantal houers in die broeikas.
- ▶Direkte kontak van die flesse met die staalrak beïnvloed die hitte-uitruiling en die spoed van die bereiking van die optimale temperatuur, daarom is dit beter om stapels flesse te vermy en elke houer te plaas
- ▶direk op die rak van die broeikas.
Die aanvanklike temperatuur van enige vars houers en media wat gebruik word, sal ook die tyd beïnvloed wat dit neem vir die selle om in hul optimale toestand te wees; hoe laer hul temperatuur, hoe langer neem dit.
As al hierdie faktore mettertyd verander, sal dit ook die veranderlikheid tussen eksperimente verhoog. Dit is nodig om hierdie temperatuurskommelings te minimaliseer, selfs al is dit nie altyd moontlik om alles te beheer nie (veral as verskeie mense dieselfde broeikas gebruik).
Hoe om temperatuurvariasies te verminder en temperatuurhersteltyd te verminder
Deur die medium voor te verhit
Sommige navorsers is gewoond daaraan om hele bottels media in 'n 37 °C waterbad voor te verhit om hulle tot hierdie temperatuur te bring voor gebruik. Dit is ook moontlik om die medium voor te verhit in 'n inkubeerder wat slegs vir mediumvoorverhitting gebruik word en nie vir selkultuur nie, waar die medium 'n optimale temperatuur kan bereik sonder om die selkulture in 'n ander inkubeerder te versteur. Maar dit, sover ons weet, is gewoonlik nie 'n bekostigbare uitgawe nie.
Binne die broeikas
Maak die broeikasdeur so min as moontlik oop en maak dit so gou as moontlik toe. Vermy koue kolle, wat temperatuurverskille in die broeikas veroorsaak. Laat spasie tussen die flesse sodat lug kan sirkuleer. Die rakke binne die broeikas kan geperforeer word. Dit maak voorsiening vir beter hitteverspreiding aangesien dit lug deur die gate laat beweeg. Die teenwoordigheid van gate kan egter lei tot verskille in selgroei, want daar is 'n temperatuurverskil tussen die area met gate en die area met meta. Om hierdie redes, as jou eksperimente hoogs eenvormige groei van die selkultuur vereis, kan jy die kultuurflesse op metaalstutte met kleiner kontakoppervlaktes plaas, wat gewoonlik nie nodig is in roetine-selkultuur nie.
Minimalisering van selverwerkingstyd
Om die tyd wat aan die selbehandelingsproses bestee word, te verminder, moet jy
- ▶Organiseer al die nodige materiale en gereedskap voordat jy begin werk.
- ▶Werk vinnig en glad, en hersien eksperimentele metodes vooraf sodat jou bedrywighede herhalend en outomaties word.
- ▶Minimaliseer kontak van vloeistowwe met omgewingslug.
- ▶Handhaaf 'n konstante temperatuur in die selkultuurlaboratorium waar jy werk.
Plasingstyd: 18 Augustus 2023