Uticaj varijacije temperature na kulturu ćelija
Temperatura je važan parametar u kulturi ćelija jer utiče na reproducibilnost rezultata. Promjene temperature iznad ili ispod 37°C imaju vrlo značajan uticaj na kinetiku rasta ćelija sisara, slično kao i kod bakterijskih ćelija. Promjene u ekspresiji gena i modifikacije u ćelijskoj strukturi, progresiji ćelijskog ciklusa i stabilnosti mRNA mogu se detektovati u ćelijama sisara nakon jednog sata na 32ºC. Pored direktnog uticaja na rast ćelija, promjene temperature utiču i na pH medijuma, jer rastvorljivost CO2 mijenja pH (pH se povećava na nižim temperaturama). Kultivisane ćelije sisara mogu tolerisati značajna smanjenja temperature. Mogu se čuvati na 4°C nekoliko dana i mogu tolerisati smrzavanje na -196°C (uz odgovarajuće uslove). Međutim, ne mogu tolerisati temperature iznad oko 2°C iznad normalne duže od nekoliko sati i brzo će umrijeti na 40°C i više. Da bi se osigurala maksimalna reproducibilnost rezultata, čak i ako ćelije prežive, potrebno je voditi računa da se temperatura održava što konstantnijom tokom inkubacije i rukovanja ćelijama izvan inkubatora.
Razlozi za promjene temperature unutar inkubatora
Primijetili ste da kada se vrata inkubatora otvore, temperatura brzo pada na postavljenu vrijednost od 37 °C. Općenito, temperatura će se oporaviti u roku od nekoliko minuta nakon zatvaranja vrata. U stvari, statičnim kulturama je potrebno vrijeme da se oporave na postavljenu temperaturu u inkubatoru. Brojni faktori mogu utjecati na vrijeme potrebno da se ćelijska kultura ponovo zagrije nakon tretmana izvan inkubatora.Ovi faktori uključuju:
- ▶dužina vremena tokom kojeg su ćelije bile van inkubatora
- ▶vrsta tikvice u kojoj se ćelije uzgajaju (geometrija utiče na prenos toplote)
- ▶Broj posuda u inkubatoru.
- ▶Direktan kontakt erlenmajerica sa čeličnom policom utiče na izmjenu toplote i brzinu postizanja optimalne temperature, pa je bolje izbjegavati slaganje erlenmajerica na hrpe i svaku posudu postaviti
- ▶direktno na policu inkubatora.
Početna temperatura bilo kojih svježih posuda i medija koji se koriste također će utjecati na vrijeme potrebno da ćelije dostignu optimalno stanje; što je niža njihova temperatura, to je duže potrebno.
Ako se svi ovi faktori mijenjaju tokom vremena, oni će također povećati varijabilnost između eksperimenata. Neophodno je minimizirati ove temperaturne fluktuacije, čak i ako nije uvijek moguće sve kontrolirati (posebno ako nekoliko ljudi koristi isti inkubator).
Kako smanjiti temperaturne varijacije i skratiti vrijeme oporavka temperature
Prethodnim zagrijavanjem medija
Neki istraživači su navikli prethodno zagrijavati cijele boce medija u vodenom kupatilu na 37 °C kako bi ih doveli na ovu temperaturu prije upotrebe. Također je moguće prethodno zagrijati medij u inkubatoru koji se koristi samo za prethodno zagrijavanje medija, a ne za kulturu ćelija, gdje medij može dostići optimalnu temperaturu bez ometanja kultura ćelija u drugom inkubatoru. Ali ovo, koliko znamo, obično nije pristupačan trošak.
Unutar inkubatora
Vrata inkubatora otvarajte što je manje moguće, a zatvarajte ih što brže. Izbjegavajte hladna mjesta koja stvaraju temperaturne razlike u inkubatoru. Ostavite prostor između erlenmajerica kako bi zrak mogao cirkulirati. Police unutar inkubatora mogu biti perforirane. To omogućava bolju raspodjelu topline jer propušta zrak kroz rupe. Međutim, prisustvo rupa može dovesti do razlika u rastu ćelija, jer postoji temperaturna razlika između područja s rupama i područja s meta. Iz ovih razloga, ako vaši eksperimenti zahtijevaju vrlo ujednačen rast kulture ćelija, erlenmajerice možete postaviti na metalne nosače s manjim kontaktnim površinama, koji obično nisu potrebni u rutinskoj kulturi ćelija.
Minimiziranje vremena obrade ćelija
Da biste smanjili vrijeme provedeno u procesu tretmana ćelija, potrebno je
- ▶Pripremite sav potreban materijal i alat prije nego što počnete s radom.
- ▶Radite brzo i glatko, unaprijed pregledavajući eksperimentalne metode kako bi vaše operacije postale repetitivne i automatizirane.
- ▶Minimizirajte kontakt tekućina sa okolnim zrakom.
- ▶Održavajte konstantnu temperaturu u laboratoriji za ćelijske kulture u kojoj radite.
Vrijeme objave: 18. avg. 2023.