Utjecaj promjene temperature na staničnu kulturu
Temperatura je važan parametar u staničnoj kulturi jer utječe na ponovljivost rezultata. Promjene temperature iznad ili ispod 37°C imaju vrlo značajan utjecaj na kinetiku rasta stanica sisavaca, slično kao i kod bakterijskih stanica. Promjene u ekspresiji gena i modifikacije u staničnoj strukturi, napredovanju staničnog ciklusa i stabilnosti mRNA mogu se otkriti u stanicama sisavaca nakon jednog sata na 32ºC. Osim što izravno utječu na rast stanica, promjene temperature utječu i na pH medija, jer topljivost CO2 mijenja pH (pH se povećava na nižim temperaturama). Uzgojene stanice sisavaca mogu tolerirati značajna sniženja temperature. Mogu se čuvati na 4°C nekoliko dana i mogu tolerirati smrzavanje na -196°C (uz odgovarajuće uvjete). Međutim, ne mogu tolerirati temperature iznad oko 2°C iznad normale dulje od nekoliko sati i brzo će umrijeti na 40°C i više. Kako bi se osigurala maksimalna ponovljivost rezultata, čak i ako stanice prežive, potrebno je paziti da se temperatura održava što konstantnijom tijekom inkubacije i rukovanja stanicama izvan inkubatora.
Razlozi za promjene temperature unutar inkubatora
Primijetili ste da kada se vrata inkubatora otvore, temperatura brzo pada na zadanu vrijednost od 37 °C. Općenito, temperatura će se oporaviti unutar nekoliko minuta nakon zatvaranja vrata. Zapravo, statičnim kulturama treba vremena da se oporave na zadanu temperaturu u inkubatoru. Brojni čimbenici mogu utjecati na vrijeme potrebno da se stanična kultura vrati na zadanu temperaturu nakon tretmana izvan inkubatora.Ovi faktori uključuju:
- ▶duljina vremena provedenog izvan inkubatora
- ▶vrsta tikvice u kojoj se stanice uzgajaju (geometrija utječe na prijenos topline)
- ▶Broj posuda u inkubatoru.
- ▶Izravan kontakt tikvica sa čeličnom policom utječe na izmjenu topline i brzinu postizanja optimalne temperature, stoga je bolje izbjegavati slaganje tikvica na hrpe i svaku posudu postaviti
- ▶izravno na polici inkubatora.
Početna temperatura bilo kojih svježih spremnika i medija koji se koriste također će utjecati na vrijeme potrebno da stanice dostignu optimalno stanje; što je niža njihova temperatura, to je dulje potrebno.
Ako se svi ovi čimbenici mijenjaju tijekom vremena, oni će također povećati varijabilnost između eksperimenata. Potrebno je smanjiti te temperaturne fluktuacije, čak i ako nije uvijek moguće kontrolirati sve (osobito ako nekoliko ljudi koristi isti inkubator).
Kako smanjiti temperaturne varijacije i skratiti vrijeme oporavka temperature
Prethodnim zagrijavanjem medija
Neki istraživači navikli su prethodno zagrijavati cijele boce medija u vodenoj kupelji na 37 °C kako bi ih doveli na tu temperaturu prije upotrebe. Također je moguće prethodno zagrijati medij u inkubatoru koji se koristi samo za prethodno zagrijavanje medija, a ne za kulturu stanica, gdje medij može postići optimalnu temperaturu bez ometanja kultura stanica u drugom inkubatoru. Ali to, koliko znamo, obično nije pristupačan trošak.
Unutar inkubatora
Vrata inkubatora otvarajte što je manje moguće, a zatvarajte ih što brže. Izbjegavajte hladna mjesta koja stvaraju temperaturne razlike u inkubatoru. Ostavite prostor između tikvica kako bi zrak mogao cirkulirati. Police unutar inkubatora mogu biti perforirane. To omogućuje bolju raspodjelu topline jer omogućuje prolaz zraka kroz rupe. Međutim, prisutnost rupa može dovesti do razlika u rastu stanica, jer postoji temperaturna razlika između područja s rupama i područja s meta. Iz tih razloga, ako vaši eksperimenti zahtijevaju vrlo ujednačen rast stanične kulture, tikvice za kulturu možete postaviti na metalne nosače s manjim kontaktnim površinama, koji obično nisu potrebni u rutinskoj kulturi stanica.
Minimiziranje vremena obrade ćelija
Kako biste smanjili vrijeme provedeno u procesu obrade stanica, potrebno je
- ▶Prije početka rada pripremite sav potreban materijal i alat.
- ▶Radite brzo i glatko, unaprijed pregledavajući eksperimentalne metode kako bi vaše operacije postale repetitivne i automatizirane.
- ▶ Smanjite kontakt tekućina s okolnim zrakom na najmanju moguću mjeru.
- ▶Održavajte konstantnu temperaturu u laboratoriju za staničnu kulturu u kojem radite.
Vrijeme objave: 18. kolovoza 2023.