中文
ტემპერატურის ცვალებადობის ეფექტი უჯრედების კულტურაზე
ტემპერატურა მნიშვნელოვანი პარამეტრია უჯრედების კულტურაში, რადგან ეს გავლენას ახდენს შედეგების რეპროდუქციულობაზე. ტემპერატურის ცვლილებები 37 ° C- ზე ზემოთ ან ქვემოთ, ძალიან მნიშვნელოვან გავლენას ახდენს ძუძუმწოვრების უჯრედების უჯრედების ზრდის კინეტიკაზე, ბაქტერიული უჯრედების მსგავსად. გენის გამოხატვის ცვლილებები და უჯრედულ სტრუქტურაში მოდიფიკაციები, უჯრედული ციკლის პროგრესირება, mRNA სტაბილურობა შეიძლება გამოვლინდეს ძუძუმწოვრების უჯრედებში ერთი საათის შემდეგ 32ºC ტემპერატურაზე. უჯრედების ზრდაზე უშუალოდ გავლენის გარდა, ტემპერატურის ცვლილებები ასევე გავლენას ახდენს მედიის pH- ზე, რადგან CO2- ის ხსნადობა ცვლის pH- ს (pH იზრდება დაბალ ტემპერატურაზე). კულტივირებულ ძუძუმწოვრების უჯრედებს შეუძლიათ მოითმინონ მნიშვნელოვანი ტემპერატურის შემცირება. მათი შენახვა შესაძლებელია 4 ° C- ზე რამდენიმე დღის განმავლობაში და შეუძლია მოითმენს გაყინვას -196 ° C- მდე (შესაბამისი პირობების გამოყენებით). ამასთან, მათ არ შეუძლიათ მოითმინონ ტემპერატურა დაახლოებით 2 ° C ტემპერატურაზე ზემოთ ნორმალურზე მეტი ხნის განმავლობაში და სწრაფად მოკვდებიან 40 ° C- ზე და ზემოთ. შედეგების მაქსიმალური რეპროდუქციულობის უზრუნველსაყოფად, მაშინაც კი, თუ უჯრედები გადარჩებიან, საჭიროა ზრუნვა, რომ ტემპერატურა მაქსიმალურად მუდმივად შეინარჩუნოს ინკუბატორის გარეთ უჯრედების ინკუბაციისა და მართვის დროს.
ინკუბატორის შიგნით ტემპერატურის ცვალებადობის მიზეზები
თქვენ შეამჩნევთ, რომ როდესაც ინკუბატორის კარი გაიხსნება, ტემპერატურა სწრაფად იკლებს მითითებულ მნიშვნელობას 37 ° C. ზოგადად, ტემპერატურა გამოჯანმრთელდება კარების დაკეტვის შემდეგ რამდენიმე წუთში. სინამდვილეში, სტატიკურ კულტურებს დრო სჭირდებათ ინკუბატორში მითითებულ ტემპერატურამდე დასაბრუნებლად. უამრავმა ფაქტორმა შეიძლება გავლენა მოახდინოს იმ დროზე, რაც უჯრედულ კულტურას სჭირდება ინკუბატორის გარეთ მკურნალობის შემდეგ ტემპერატურის აღდგენის შემდეგ.ეს ფაქტორები მოიცავს
- ▶ უჯრედების სიგრძე ინკუბატორისგან გამოვიდა
- ▶ ფლაკონის ტიპი, რომელშიც უჯრედები იზრდება (გეომეტრია გავლენას ახდენს სითბოს გადაცემაზე)
- ▶ კონტეინერების რაოდენობა ინკუბატორში.
- ▶ ფარფების უშუალო კონტაქტი ფოლადის თაროზე გავლენას ახდენს სითბოს გაცვლაზე და ოპტიმალურ ტემპერატურამდე მიღწევის სიჩქარეზე, ამიტომ უმჯობესია თავიდან აიცილოთ ფლაკონების დასტა და თითოეული გემის განთავსება
- ▶ უშუალოდ ინკუბატორის თაროზე.
გამოყენებული ნებისმიერი ახალი კონტეინერების და მედიის საწყისი ტემპერატურა ასევე იმოქმედებს იმ დროზე, რაც უჯრედებს მათ ოპტიმალურ მდგომარეობაში ჰქონდეს; რაც უფრო დაბალია მათი ტემპერატურა, მით უფრო გრძელია საჭირო.
თუ ყველა ეს ფაქტორი დროთა განმავლობაში შეიცვლება, ისინი ასევე გაზრდის ცვალებადობას ექსპერიმენტებს შორის. აუცილებელია ამ ტემპერატურის რყევების შემცირება, მაშინაც კი, თუ ყოველთვის არ არის შესაძლებელი ყველაფრის კონტროლი (განსაკუთრებით იმ შემთხვევაში, თუ რამდენიმე ადამიანი იყენებს იმავე ინკუბატორს).
როგორ შემცირდეს ტემპერატურის ცვალებადობა და შეამციროს ტემპერატურის აღდგენის დრო
საშუალო წინასწარ გათბობით
ზოგიერთი მკვლევარი მიჩვეული აქვს მედიის მთლიანი ბოთლების წინასწარ დათბობას 37 ° C წყლის აბაზანაში, რათა გამოყენებამდე ამ ტემპერატურაზე მიიყვანოს. ასევე შესაძლებელია საშუალო გათბობა ინკუბატორში, რომელიც გამოიყენება მხოლოდ საშუალო წინასწარ გათბობისთვის და არა უჯრედული კულტურისთვის, სადაც საშუალო შეუძლია მიაღწიოს ოპტიმალურ ტემპერატურას, სხვა ინკუბატორში უჯრედების კულტურის დარღვევის გარეშე. მაგრამ ეს, რამდენადაც ვიცით, ჩვეულებრივ არ არის ხელმისაწვდომი ხარჯები.
ინკუბატორის შიგნით
გახსენით ინკუბატორის კარი რაც შეიძლება ნაკლებად და დახურეთ რაც შეიძლება სწრაფად. მოერიდეთ ცივ ლაქებს, რომლებიც ქმნიან ტემპერატურულ განსხვავებებს ინკუბატორში. დატოვეთ სივრცე ფარებს შორის, რათა ჰაერი მიმოქცევაში იყოს. ინკუბატორის შიგნით თაროები შეიძლება პერფორირებული იყოს. ეს საშუალებას იძლევა უკეთესი სითბოს განაწილება, რადგან ის საშუალებას აძლევს ჰაერს გაიაროს ხვრელები. ამასთან, ხვრელების არსებობამ შეიძლება გამოიწვიოს უჯრედების ზრდის განსხვავებები, რადგან არსებობს ტემპერატურის სხვაობა ხვრელებთან და მეტა ფართობთან. ამ მიზეზების გამო, თუ თქვენი ექსპერიმენტები საჭიროებს უჯრედების კულტურის უაღრესად ერთგვაროვან ზრდას, შეგიძლიათ განათავსოთ კულტურის ფარები მეტალის მხარდაჭერით მცირე კონტაქტური ზედაპირებით, რაც, როგორც წესი, არ არის აუცილებელი რუტინული უჯრედების კულტურაში.
უჯრედების დამუშავების დროის შემცირება
უჯრედების მკურნალობის პროცესში დახარჯული დროის შესამცირებლად, თქვენ გჭირდებათ
- ▶ მოაწყეთ ყველა საჭირო მასალა და ინსტრუმენტი, სანამ დაიწყებთ მუშაობას.
- ▶ სწრაფად და შეუფერხებლად იმუშავეთ, წინასწარ გადახედეთ ექსპერიმენტულ მეთოდებს ისე, რომ თქვენი ოპერაციები განმეორებადი და ავტომატიზირებული გახდეს.
- ▶ შეამცირეთ სითხეების კონტაქტი ატმოსფერული ჰაერით.
- ▶ შეინარჩუნეთ მუდმივი ტემპერატურა უჯრედის კულტურის ლაბორატორიაში, სადაც მუშაობთ.
პოსტის დრო: აგვისტო -18-2023