ტემპერატურის ვარიაციის გავლენა უჯრედულ კულტურაზე
ტემპერატურა უჯრედულ კულტურაში მნიშვნელოვანი პარამეტრია, რადგან ის გავლენას ახდენს შედეგების რეპროდუცირებადობაზე. ტემპერატურის ცვლილებები 37°C-ზე ზემოთ ან ქვემოთ ძალიან მნიშვნელოვან გავლენას ახდენს ძუძუმწოვრების უჯრედების ზრდის კინეტიკაზე, ბაქტერიული უჯრედების მსგავსად. გენის ექსპრესიის ცვლილებები და უჯრედული სტრუქტურის მოდიფიკაციები, უჯრედული ციკლის პროგრესია, mRNA სტაბილურობა შეიძლება გამოვლინდეს ძუძუმწოვრების უჯრედებში 32°C ტემპერატურაზე ერთი საათის შემდეგ. უჯრედების ზრდაზე პირდაპირი ზემოქმედების გარდა, ტემპერატურის ცვლილებები ასევე მოქმედებს გარემოს pH-ზე, რადგან CO2-ის ხსნადობა ცვლის pH-ს (pH იზრდება დაბალ ტემპერატურაზე). კულტივირებული ძუძუმწოვრების უჯრედები იტანენ ტემპერატურის მნიშვნელოვან ვარდნას. მათი შენახვა შესაძლებელია 4°C ტემპერატურაზე რამდენიმე დღის განმავლობაში და შეუძლიათ -196°C-მდე გაყინვის ატანა (შესაბამისი პირობების გამოყენებით). თუმცა, მათ არ შეუძლიათ ნორმალურზე დაახლოებით 2°C-ზე მეტი ტემპერატურის ატანა რამდენიმე საათზე მეტხანს და სწრაფად იღუპებიან 40°C და მეტ ტემპერატურაზე. შედეგების მაქსიმალური რეპროდუცირებადობის უზრუნველსაყოფად, მაშინაც კი, თუ უჯრედები გადარჩებიან, ინკუბატორის გარეთ უჯრედების ინკუბაციისა და დამუშავების დროს საჭიროა სიფრთხილის გამოჩენა, რათა ტემპერატურა მაქსიმალურად მუდმივი იყოს.
ინკუბატორში ტემპერატურის ცვალებადობის მიზეზები
შეამჩნევდით, რომ ინკუბატორის კარის გაღებისას ტემპერატურა სწრაფად ეცემა 37°C-მდე. ზოგადად, ტემპერატურა კარის დახურვიდან რამდენიმე წუთში აღდგება. სინამდვილეში, სტატიკურ კულტურებს ინკუბატორში დადგენილ ტემპერატურამდე აღსადგენად დრო სჭირდებათ. ინკუბატორის გარეთ დამუშავების შემდეგ უჯრედული კულტურის ტემპერატურის აღსადგენად საჭირო დროზე გავლენას ახდენს რიგი ფაქტორები.ეს ფაქტორები მოიცავს:
- ▶ უჯრედების ინკუბატორიდან გამოსვლის ხანგრძლივობა
- ▶ კოლბის ტიპი, რომელშიც უჯრედები იზრდება (გეომეტრია გავლენას ახდენს სითბოს გადაცემაზე)
- ▶ ინკუბატორში კონტეინერების რაოდენობა.
- ▶ კოლბების ფოლადის თაროსთან პირდაპირი კონტაქტი გავლენას ახდენს სითბოს გაცვლაზე და ოპტიმალური ტემპერატურის მიღწევის სიჩქარეზე, ამიტომ უმჯობესია თავიდან აიცილოთ კოლბების დასტა და თითოეული ჭურჭელი ერთმანეთზე მოათავსოთ.
- ▶პირდაპირ ინკუბატორის თაროზე.
გამოყენებული ნებისმიერი ახალი კონტეინერისა და მედიის საწყისი ტემპერატურა ასევე გავლენას მოახდენს უჯრედების ოპტიმალურ მდგომარეობაში მოხვედრის დროზე; რაც უფრო დაბალია მათი ტემპერატურა, მით უფრო მეტი დრო სჭირდება ამას.
თუ ყველა ეს ფაქტორი დროთა განმავლობაში შეიცვლება, ისინი ექსპერიმენტებს შორის ცვალებადობასაც გაზრდის. აუცილებელია ტემპერატურის ამ რყევების მინიმუმამდე დაყვანა, მაშინაც კი, თუ ყველაფრის კონტროლი ყოველთვის არ არის შესაძლებელი (განსაკუთრებით მაშინ, თუ ერთსა და იმავე ინკუბატორს რამდენიმე ადამიანი იყენებს).
როგორ შევამციროთ ტემპერატურის ვარიაციები და შევამციროთ ტემპერატურის აღდგენის დრო
საშუალების წინასწარი გაცხელებით
ზოგიერთი მკვლევარი მიჩვეულია გამოყენებამდე მედიის მთლიანი ბოთლების წინასწარ გაცხელებას 37°C წყლის აბაზანაში, რათა ისინი ამ ტემპერატურამდე მიიყვანოს. ასევე შესაძლებელია მედიის წინასწარ გაცხელება ინკუბატორში, რომელიც გამოიყენება მხოლოდ მედიის წინასწარი გაცხელებისთვის და არა უჯრედული კულტურისთვის, სადაც მედიის ოპტიმალურ ტემპერატურას შეუძლია მიაღწიოს სხვა ინკუბატორში უჯრედული კულტურების დარღვევის გარეშე. თუმცა, რამდენადაც ჩვენთვის ცნობილია, ეს, როგორც წესი, ხელმისაწვდომი ხარჯი არ არის.
ინკუბატორის შიგნით
ინკუბატორის კარი რაც შეიძლება ნაკლებად გააღეთ და რაც შეიძლება სწრაფად დახურეთ. მოერიდეთ ცივ წერტილებს, რომლებიც ინკუბატორში ტემპერატურულ სხვაობას ქმნის. კოლბებს შორის დატოვეთ სივრცე ჰაერის ცირკულაციისთვის. ინკუბატორის შიგნით თაროები შეიძლება იყოს პერფორირებული. ეს ხელს უწყობს სითბოს უკეთეს განაწილებას, რადგან ჰაერს ნახვრეტებში გავლის საშუალება აქვს. თუმცა, ნახვრეტების არსებობამ შეიძლება გამოიწვიოს უჯრედების ზრდის სხვაობა, რადგან ტემპერატურული სხვაობაა ნახვრეტებიან და მეტა-ნაჭუჭებიან ადგილებს შორის. ამ მიზეზების გამო, თუ თქვენი ექსპერიმენტები მოითხოვს უჯრედული კულტურის მაღალ ერთგვაროვან ზრდას, შეგიძლიათ კულტურის კოლბები მოათავსოთ მეტალის საყრდენებზე უფრო პატარა შეხების ზედაპირებით, რაც, როგორც წესი, არ არის აუცილებელი რუტინული უჯრედული კულტურების დროს.
უჯრედების დამუშავების დროის მინიმიზაცია
უჯრედების დამუშავების პროცესში დახარჯული დროის მინიმიზაციისთვის, თქვენ უნდა:
- ▶ მუშაობის დაწყებამდე მოაწესრიგეთ ყველა საჭირო მასალა და ხელსაწყო.
- ▶ იმუშავეთ სწრაფად და შეუფერხებლად, წინასწარ გადახედეთ ექსპერიმენტულ მეთოდებს, რათა თქვენი ოპერაციები განმეორებადი და ავტომატიზირებული გახდეს.
- ▶ მინიმუმამდე დაიყვანეთ სითხეების კონტაქტი გარემოს ჰაერთან.
- ▶ შეინარჩუნეთ მუდმივი ტემპერატურა უჯრედების კულტურის ლაბორატორიაში, სადაც მუშაობთ.
გამოქვეყნების დრო: 2023 წლის 18 აგვისტო