Effectus variationis temperaturae in culturam cellularum
Temperatura est parametrus magni momenti in cultura cellularum, quia reproducibilitatem eventuum afficit. Mutationes temperaturae supra vel infra 37°C effectum permagnum habent in cineticam accretionis cellularum mammalium, similem ei cellularum bacterialium. Mutationes in expressione genorum et modificationes in structura cellulari, progressio cycli cellularis, stabilitas mRNA detegi possunt in cellulis mammalium post unam horam ad 32°C. Praeterquam quod accretionem cellularum directe afficiunt, mutationes temperaturae etiam pH medii afficiunt, cum solubilitas CO2 pH mutat (pH augetur ad temperaturas inferiores). Cellulae mammalium cultae significantes temperaturae decrementa tolerare possunt. Conservari possunt ad 4°C per aliquot dies et tolerare possunt congelationem ad -196°C (conditionibus aptis adhibitis). Attamen, temperaturas supra circiter 2°C supra normalem non tolerant plus quam paucas horas et cito morientur ad 40°C et supra. Ut maxima reproducibilitas eventuum assequatur, etiam si cellulae supervivant, cura adhibenda est ut temperatura quam constans maneat per incubationem et tractationem cellularum extra incubatorem.
Causae variationum temperaturae intra incubatorem
Animadvertisti, cum ianua incubatoris aperitur, temperaturam celeriter ad valorem statutum 37°C descendere. In genere, temperatura intra pauca minuta postquam ianua clausa est restituetur. Re vera, culturae staticae tempus requirunt ut ad temperaturam statutam in incubatore recuperent. Plures factores tempus afficere possunt quo cultura cellularum temperaturam post curationem extra incubatorem recuperat.Hi factores includunt:
- ▶Tempus quo cellulae extra incubatorem fuerunt
- ▶genus ampullae in qua cellulae coluntur (geometria translationem caloris afficit)
- ▶Numerus receptaculorum in incubatore.
- ▶ Contactus directus ampullarum cum tabula ferrea commutationem caloris et celeritatem temperaturae optimae attingendae afficit, ergo melius est acervos ampullarum vitare et singula vasa collocare
- ▶directe in pluteo incubatoris.
Temperatura initialis quorumlibet vasorum recentium et mediorum adhibitorum etiam tempus afficiet quo cellulae ad statum optimum perveniunt; quo minor temperatura, eo diutius hoc requiritur.
Si omnes hi factores tempore mutantur, etiam variabilitatem inter experimenta augebunt. Necesse est has fluctuationes temperaturae ad minimum reducere, etiamsi non semper omnia moderari licet (praesertim si plures homines eodem incubatore utuntur).
Quomodo variationes temperaturae minuantur et tempus recuperationis temperaturae reducatur
Medium praecalefaciendo
Quidam investigatores consueverunt ampullas integras medii in balneo aquae 37°C praecalefacere ut ad hanc temperaturam ante usum perducantur. Etiam possibile est medium praecalefacere in incubatore quod solum ad praecalefactionem medii, non ad culturam cellularum, adhibetur, ubi medium temperaturam optimam attingere potest sine perturbatione culturarum cellularum in alio incubatore. Sed hoc, quantum scimus, plerumque non est sumptus parabilis.
Intra Incubatorem
Ostium incubatoris quam minimum aperi et quam celerrime claude. Vitanda sunt loca frigida, quae differentias temperaturae in incubatore creant. Spatium inter ampullas relinque ut aer circulare possit. Plutei intra incubatorem perforari possunt. Hoc meliorem distributionem caloris permittit, cum aerem per foramina transire sinat. Attamen, praesentia foraminum ad differentias in incremento cellularum ducere potest, quia differentia temperaturae est inter aream cum foraminibus et aream cum meta. Ob has causas, si experimenta tua incrementum valde uniforme culturae cellularum requirunt, ampullas culturae in fulcris metallicis cum superficiebus contactus minoribus ponere potes, quae plerumque non necessaria sunt in cultura cellularum cotidiana.
Tempus Processus Cellularum Minimizans
Ad tempus in curatione cellularum impensum minuendum, necesse est tibi
- ▶ Omnia necessaria materia et instrumenta antequam laborem incipias ordina.
- ▶Celeriter et leniter labora, methodos experimentales antea recognoscens ut operationes tuae repetitivae et automatariae fiant.
- ▶ Contactum liquidorum cum aere ambiente ad minimum redige.
- ▶Temperaturam constantem in laboratorio culturae cellularum ubi laboras serva.
Tempus publicationis: XVIII Augusti, MMXXIII