Effekt vun Temperaturvariatiounen op Zellkultur
D'Temperatur ass e wichtege Parameter an der Zellkultur, well se d'Reproduzéierbarkeet vun de Resultater beaflosst. Temperaturännerungen iwwer oder ënner 37°C hunn e ganz bedeitenden Effekt op d'Zellwuesstumskinetik vu Mamendéierzellen, ähnlech wéi bei Bakterienzellen. Ännerungen an der Genexpression a Modifikatiounen an der Zellstruktur, dem Zellzyklusfortschrëtt an der mRNA-Stabilitéit kënnen a Mamendéierzellen no enger Stonn bei 32°C nogewise ginn. Nieft dem direkten Afloss op d'Zellwuesstum beaflossen d'Temperaturännerungen och de pH-Wäert vum Medium, well d'Léislechkeet vu CO2 de pH-Wäert ännert (de pH-Wäert klëmmt bei méi niddregen Temperaturen). Kultivéiert Mamendéierzellen kënnen bedeitend Temperatursenkungen toleréieren. Si kënnen e puer Deeg bei 4°C gelagert ginn a kënnen d'Gefrierung op -196°C toleréieren (ënner passenden Konditiounen). Si toleréiere awer keng Temperaturen iwwer ongeféier 2°C iwwer dem Normalwäert fir méi wéi e puer Stonnen a stierwen séier bei 40°C a méi. Fir eng maximal Reproduzéierbarkeet vun de Resultater ze garantéieren, och wann d'Zellen iwwerliewen, muss drop opgepasst ginn, datt d'Temperatur während der Inkubatioun an dem Ëmgang mat den Zellen ausserhalb vum Inkubator sou konstant wéi méiglech gehale gëtt.
Grënn fir Temperaturschwankungen am Inkubator
Dir hutt sécherlech gemierkt, datt wann d'Inkubatordier opgemaach gëtt, d'Temperatur séier op de festgeluechte Wäert vun 37 °C fällt. Am Allgemengen erhëlt sech d'Temperatur bannent e puer Minutten nodeems d'Dier zougemaach gouf. Tatsächlech brauche statesch Kulturen Zäit fir sech op déi festgeluecht Temperatur am Inkubator ze erhuelen. Eng Rei vu Faktoren kënnen d'Zäit beaflossen, déi et brauch, bis eng Zellkultur hir Temperatur no der Behandlung ausserhalb vum Inkubator erëmkritt.Dës Faktoren enthalen:
- ▶d'Zäit, déi d'Zellen ausserhalb vum Inkubator waren
- ▶d'Aart vu Kolben, an deem d'Zellen ugebaut ginn (d'Geometrie beaflosst den Hëtzttransfer)
- ▶Zuel vun de Behälter am Inkubator.
- ▶Direkten Kontakt vun de Kolben mam Stolregal beaflosst den Hëtzewiessel an d'Geschwindegkeet fir déi optimal Temperatur z'erreechen, dofir ass et besser, Stapel vu Kolben ze vermeiden an all Behälter opzestellen
- ▶direkt um Regal vum Inkubator.
Déi initial Temperatur vun all frësche Behälter a Medien, déi benotzt ginn, beaflosst och d'Zäit, déi et dauert, bis d'Zellen an hirem optimalen Zoustand sinn; wat hir Temperatur méi niddreg ass, wat et méi laang dauert.
Wann all dës Faktoren sech mat der Zäit änneren, erhéijen se och d'Variabilitéit tëscht den Experimenter. Et ass néideg, dës Temperaturschwankungen ze minimiséieren, och wann et net ëmmer méiglech ass, alles ze kontrolléieren (besonnesch wann e puer Leit deeselwechten Inkubator benotzen).
Wéi een Temperaturschwankungen miniméiert an d'Temperaturerhuelungszäit verkierzt
Duerch d'Virhëtzen vum Medium
Verschidde Fuerscher si gewinnt, ganz Fläsche mat Medien an engem Waasserbad vun 37 °C virzewiermen, fir se virum Gebrauch op dës Temperatur ze bréngen. Et ass och méiglech, de Medium an engem Inkubator virzewiermen, deen nëmme fir d'Virhëtzung vum Medium a net fir Zellkultur benotzt gëtt, wou de Medium eng optimal Temperatur erreeche kann, ouni d'Zellkulturen an engem aneren Inkubator ze stéieren. Awer dat ass, souwäit mir wëssen, normalerweis keng bezuelbar Ausgab.
Am Inkubator
Maacht d'Inkubatordier sou wéineg wéi méiglech op a maacht se sou séier wéi méiglech zou. Vermeit kal Plazen, déi Temperaturënnerscheeder am Inkubator verursaachen. Loosst Plaz tëscht de Kolben, fir datt d'Loft zirkuléiere kann. D'Regaler am Inkubator kënne perforéiert ginn. Dëst erméiglecht eng besser Hëtztverdeelung, well d'Loft duerch d'Lächer passéiere kann. D'Präsenz vu Lächer kann awer zu Ënnerscheeder am Zellwuesstum féieren, well et en Temperaturënnerscheed tëscht dem Beräich mat Lächer an dem Beräich mat Meta gëtt. Aus dëse Grënn, wann Är Experimenter e ganz gläichméissegt Wuesstum vun der Zellkultur erfuerderen, kënnt Dir d'Kulturkolben op Metallënnerstëtzunge mat méi klenge Kontaktflächen placéieren, déi normalerweis net an der routineméisseger Zellkultur néideg sinn.
Minimiséierung vun der Zellveraarbechtungszäit
Fir d'Zäit ze minimiséieren, déi beim Zellbehandlungsprozess opgebraucht ass, musst Dir
- ▶Organiséiert all néideg Materialien an Tools ier Dir ufänkt mat schaffen.
- ▶Schafft séier a reibungslos, a préift experimentell Methoden am Viraus, sou datt Är Operatiounen repetitiv an automatiséiert ginn.
- ▶Miniméiert de Kontakt vu Flëssegkeeten mat der Ëmgéigendloft.
- ▶Halt eng konstant Temperatur am Zellkulturlaboratoire, wou Dir schafft.
Zäitpunkt vun der Verëffentlechung: 18. August 2023