Утицај варијације температуре на ћелијску културу
Температура је важан параметар у ћелијској култури јер утиче на репродуктивност резултата. Промене температуре изнад или испод 37°C имају веома значајан утицај на кинетику раста ћелија ћелија сисара, слично као и код бактеријских ћелија. Промене у експресији гена и модификације у ћелијској структури, прогресији ћелијског циклуса, стабилности мРНК могу се детектовати у ћелијама сисара након једног сата на 32°C. Поред директног утицаја на раст ћелија, промене температуре такође утичу на pH вредност подлоге, јер растворљивост CO2 мења pH вредност (pH се повећава на нижим температурама). Култивисане ћелије сисара могу толерисати значајна смањења температуре. Могу се чувати на 4°C неколико дана и могу толерисати замрзавање на -196°C (уз одговарајуће услове). Међутим, не могу толерисати температуре изнад око 2°C изнад нормалних дуже од неколико сати и брзо ће угинути на 40°C и више. Да би се осигурала максимална репродуктивност резултата, чак и ако ћелије преживе, потребно је водити рачуна да се температура одржава што је могуће константнијом током инкубације и руковања ћелијама ван инкубатора.
Разлози за температурне промене унутар инкубатора
Приметили сте да када се врата инкубатора отворе, температура брзо пада на подешену вредност од 37 °C. Генерално, температура ће се опоравити у року од неколико минута након што се врата затворе. У ствари, статичким културама је потребно време да се опораве на подешену температуру у инкубатору. Низ фактора може утицати на време потребно ћелијској култури да поврати температуру након третмана ван инкубатора.Ови фактори укључују:
- ▶дужина времена које су ћелије биле ван инкубатора
- ▶врста бочице у којој се ћелије гаје (геометрија утиче на пренос топлоте)
- ▶Број контејнера у инкубатору.
- ▶Директан контакт ерленма са челичном полицом утиче на размену топлоте и брзину достизања оптималне температуре, па је боље избегавати гомиле ерленма и сваку посуду поставити
- ▶директно на полици инкубатора.
Почетна температура било којих свежих контејнера и медија који се користе такође ће утицати на време потребно да ћелије буду у свом оптималном стању; што је њихова температура нижа, то је дуже потребно.
Ако се сви ови фактори мењају током времена, они ће такође повећати варијабилност између експеримената. Неопходно је минимизирати ове температурне флуктуације, чак и ако није увек могуће контролисати све (посебно ако више људи користи исти инкубатор).
Како минимизирати температурне варијације и скратити време опоравка температуре
Претходним загревањем медијума
Неки истраживачи су навикли да претходно загревају целе бочице медијума у воденом купатилу на 37 °C како би их довели до ове температуре пре употребе. Такође је могуће претходно загрејати медијум у инкубатору који се користи само за претходно загревање медијума, а не за ћелијску културу, где медијум може достићи оптималну температуру без ометања ћелијских култура у другом инкубатору. Али ово, колико знамо, обично није приступачан трошак.
Унутар инкубатора
Врата инкубатора отварајте што је мање могуће и затварајте их што брже. Избегавајте хладна места, која стварају температурне разлике у инкубатору. Оставите простор између боца како би ваздух могао да циркулише. Полице унутар инкубатора могу бити перфориране. Ово омогућава бољу расподелу топлоте јер омогућава ваздуху да пролази кроз рупе. Међутим, присуство рупа може довести до разлика у расту ћелија, јер постоји температурна разлика између подручја са рупама и подручја са мета. Из ових разлога, ако ваши експерименти захтевају веома уједначен раст ћелијске културе, боце за културу можете поставити на металне носаче са мањим контактним површинама, што обично није потребно у рутинској култури ћелија.
Минимизирање времена обраде ћелија
Да бисте смањили време проведено у процесу обраде ћелија, потребно је
- ▶Организуйте све потребне материјале и алате пре него што почнете са радом.
- ▶Радите брзо и глатко, унапред прегледајући експерименталне методе како би ваше операције постале понављајуће и аутоматизоване.
- ▶ Смањите контакт течности са околним ваздухом.
- ▶Одржавајте константну температуру у лабораторији за ћелијске културе у којој радите.
Време објаве: 18. август 2023.