سیل کلچر پر درجہ حرارت کی تبدیلی کا اثر
سیل کلچر میں درجہ حرارت ایک اہم پیرامیٹر ہے کیونکہ یہ نتائج کی تولیدی صلاحیت کو متاثر کرتا ہے۔ 37 ° C سے اوپر یا اس سے نیچے درجہ حرارت کی تبدیلیوں کا بیکٹیریل خلیوں کی طرح ممالیہ خلیوں کے خلیوں کی نشوونما پر بہت اہم اثر پڑتا ہے۔ جین کے اظہار میں تبدیلی اور سیلولر ڈھانچے میں تبدیلیاں، سیل سائیکل کی ترقی، mRNA استحکام 32ºC پر ایک گھنٹے کے بعد ممالیہ کے خلیوں میں معلوم کیا جا سکتا ہے۔ سیل کی نشوونما کو براہ راست متاثر کرنے کے علاوہ، درجہ حرارت میں تبدیلی میڈیا کے پی ایچ کو بھی متاثر کرتی ہے، کیونکہ CO2 کی حل پذیری پی ایچ کو تبدیل کرتی ہے (کم درجہ حرارت پر پی ایچ بڑھتا ہے)۔ مہذب ممالیہ کے خلیے درجہ حرارت میں نمایاں کمی کو برداشت کر سکتے ہیں۔ انہیں 4 ° C پر کئی دنوں تک ذخیرہ کیا جا سکتا ہے اور یہ -196 ° C (مناسب حالات کا استعمال کرتے ہوئے) تک جمنے کو برداشت کر سکتے ہیں۔ تاہم، وہ معمول سے تقریباً 2 °C سے زیادہ درجہ حرارت کو چند گھنٹوں سے زیادہ برداشت نہیں کر سکتے اور 40 °C اور اس سے اوپر کے درجہ حرارت پر جلد مر جائیں گے۔ نتائج کی زیادہ سے زیادہ تولیدی صلاحیت کو یقینی بنانے کے لیے، یہاں تک کہ اگر خلیے زندہ رہتے ہیں، انکیوبیٹر کے باہر خلیوں کے انکیوبیشن اور ہینڈلنگ کے دوران درجہ حرارت کو ہر ممکن حد تک برقرار رکھنے کے لیے احتیاط کی ضرورت ہے۔
انکیوبیٹر کے اندر درجہ حرارت میں تبدیلی کی وجوہات
آپ نے دیکھا ہو گا کہ جب انکیوبیٹر کا دروازہ کھولا جاتا ہے تو درجہ حرارت تیزی سے 37 ° C کی مقررہ قدر تک گر جاتا ہے۔ عام طور پر، دروازہ بند ہونے کے بعد درجہ حرارت چند منٹوں میں ٹھیک ہو جائے گا۔ درحقیقت، جامد ثقافتوں کو انکیوبیٹر میں مقررہ درجہ حرارت پر بحال ہونے کے لیے وقت درکار ہوتا ہے۔ انکیوبیٹر کے باہر علاج کے بعد سیل کلچر کو دوبارہ درجہ حرارت حاصل کرنے میں لگنے والے وقت کو متعدد عوامل متاثر کر سکتے ہیں۔ان عوامل میں شامل ہیں:
- ▶سیلز کے انکیوبیٹر سے باہر ہونے کا وقت
- ▶ فلاسک کی قسم جس میں خلیات بڑھے ہیں (جیومیٹری گرمی کی منتقلی کو متاثر کرتی ہے)
- ▶انکیوبیٹر میں کنٹینرز کی تعداد۔
- ▶ اسٹیل شیلف کے ساتھ فلاسکس کا براہ راست رابطہ گرمی کے تبادلے اور زیادہ سے زیادہ درجہ حرارت تک پہنچنے کی رفتار کو متاثر کرتا ہے، لہذا بہتر ہے کہ فلاسکس کے ڈھیروں سے بچیں اور ہر برتن کو رکھیں۔
- ▶ براہ راست انکیوبیٹر کے شیلف پر۔
استعمال ہونے والے کسی بھی تازہ کنٹینرز اور میڈیا کا ابتدائی درجہ حرارت اس وقت کو بھی متاثر کرے گا جو خلیات کو اپنی بہترین حالت میں ہونے میں لگتا ہے۔ ان کا درجہ حرارت جتنا کم ہوتا ہے، اتنا ہی زیادہ وقت لگتا ہے۔
اگر یہ تمام عوامل وقت کے ساتھ تبدیل ہوتے ہیں، تو وہ تجربات کے درمیان تغیر کو بھی بڑھائیں گے۔ درجہ حرارت کے ان اتار چڑھاو کو کم سے کم کرنا ضروری ہے، چاہے ہر چیز پر قابو پانا ہمیشہ ممکن نہ ہو (خاص طور پر اگر کئی لوگ ایک ہی انکیوبیٹر استعمال کر رہے ہوں)۔
درجہ حرارت کے تغیرات کو کیسے کم کیا جائے اور درجہ حرارت کی بحالی کے وقت کو کیسے کم کیا جائے۔
میڈیم کو پہلے سے گرم کرکے
کچھ محققین میڈیا کی پوری بوتلوں کو استعمال سے پہلے اس درجہ حرارت پر لانے کے لیے 37 °C کے پانی کے غسل میں پہلے سے گرم کرنے کے عادی ہیں۔ ایک انکیوبیٹر میں میڈیم کو پہلے سے گرم کرنا بھی ممکن ہے جو صرف میڈیم پری ہیٹنگ کے لیے استعمال ہوتا ہے سیل کلچر کے لیے نہیں، جہاں میڈیم کسی دوسرے انکیوبیٹر میں سیل کلچرز کو پریشان کیے بغیر زیادہ سے زیادہ درجہ حرارت تک پہنچ سکتا ہے۔ لیکن یہ، جہاں تک ہم جانتے ہیں، عام طور پر سستی خرچ نہیں ہوتا ہے۔
انکیوبیٹر کے اندر
انکیوبیٹر کا دروازہ جتنا کم ہو سکے کھولیں اور اسے جلد سے جلد بند کریں۔ ٹھنڈے مقامات سے پرہیز کریں، جو انکیوبیٹر میں درجہ حرارت میں فرق پیدا کرتے ہیں۔ فلاسکس کے درمیان جگہ چھوڑ دیں تاکہ ہوا گردش کر سکے۔ انکیوبیٹر کے اندر کی شیلفوں کو سوراخ کیا جا سکتا ہے۔ یہ گرمی کی بہتر تقسیم کی اجازت دیتا ہے کیونکہ یہ ہوا کو سوراخوں سے گزرنے دیتا ہے۔ تاہم، سوراخ کی موجودگی سیل کی ترقی میں فرق کا باعث بن سکتی ہے، کیونکہ سوراخ والے علاقے اور میٹا والے علاقے کے درمیان درجہ حرارت کا فرق ہوتا ہے۔ ان وجوہات کی بناء پر، اگر آپ کے تجربات میں سیل کلچر کی انتہائی یکساں نشوونما کی ضرورت ہوتی ہے، تو آپ کلچر فلاسکس کو دھاتی سپورٹ پر چھوٹے رابطے کی سطحوں کے ساتھ رکھ سکتے ہیں، جو عام طور پر روٹین سیل کلچر میں ضروری نہیں ہوتے ہیں۔
سیل پروسیسنگ کے وقت کو کم سے کم کرنا
سیل ٹریٹمنٹ کے عمل میں خرچ ہونے والے وقت کو کم کرنے کے لیے، آپ کو ضرورت ہے۔
- ▶ کام شروع کرنے سے پہلے تمام ضروری مواد اور آلات کو ترتیب دیں۔
- ▶ تجرباتی طریقوں کا پہلے سے جائزہ لیتے ہوئے تیزی سے اور آسانی سے کام کریں تاکہ آپ کے کام دہرائے جانے والے اور خودکار بن جائیں۔
- ▶ محیط ہوا کے ساتھ مائعات کا رابطہ کم سے کم کریں۔
- ▶ جس سیل کلچر لیب میں آپ کام کرتے ہیں وہاں درجہ حرارت کو مستقل رکھیں۔
پوسٹ ٹائم: اگست 18-2023