Effettu di a variazione di a temperatura nantu à a cultura cellulare
A temperatura hè un parametru impurtante in a cultura cellulare perchè affetta a riproducibilità di i risultati. I cambiamenti di temperatura sopra o sottu à 37 ° C anu un effettu assai significativu nantu à a cinetica di crescita cellulare di e cellule di mammiferi, simile à quella di e cellule batteriche. I cambiamenti in l'espressione genica è e mudificazioni in a struttura cellulare, a progressione di u ciclu cellulare, a stabilità di l'mRNA ponu esse rilevate in e cellule di mammiferi dopu à un'ora à 32 ° C. Oltre à influenzà direttamente a crescita cellulare, i cambiamenti di temperatura affettanu ancu u pH di u mezu, postu chì a solubilità di CO2 altera u pH (u pH aumenta à temperature più basse). E cellule di mammiferi cultivate ponu tollerà diminuzioni significative di temperatura. Puderanu esse conservate à 4 ° C per parechji ghjorni è ponu tollerà a congelazione finu à -196 ° C (usendu cundizioni adatte). Tuttavia, ùn ponu tollerà temperature sopra à circa 2 ° C sopra à a nurmale per più di qualchì ora è moriranu rapidamente à 40 ° C è più. Per assicurà a massima riproducibilità di i risultati, ancu s'è e cellule sopravvivenu, ci vole à fà attenzione à mantene a temperatura u più costante pussibule durante l'incubazione è a manipulazione di e cellule fora di l'incubatore.
Ragioni di e variazioni di temperatura in l'incubatrice
Averete nutatu chì quandu a porta di l'incubatore hè aperta, a temperatura cala rapidamente à u valore stabilitu di 37 °C. In generale, a temperatura si riprenderà in pochi minuti dopu a chjusura di a porta. In fatti, e culture statiche anu bisognu di tempu per ricuperà a temperatura stabilita in l'incubatore. Un certu numeru di fattori ponu influenzà u tempu chì ci vole à una cultura cellulare per ricuperà a temperatura dopu u trattamentu fora di l'incubatore.Questi fattori includenu:
- ▶ a durata di u tempu chì e cellule sò state fora di l'incubatore
- ▶ u tipu di matrazzu in u quale e cellule sò cultivate (a geometria influenza u trasferimentu di calore)
- ▶Numeru di cuntenitori in l'incubatrice.
- ▶U cuntattu direttu di i fiaschi cù u ripianu d'acciaiu affetta u scambiu di calore è a velocità di righjunghje a temperatura ottima, dunque hè megliu evità pile di fiaschi è mette ogni vasu
- ▶direttamente nantu à u scaffale di l'incubatrice.
A temperatura iniziale di qualsiasi cuntenitore frescu è di i mezi utilizati avarà ancu un effettu nant'à u tempu chì ci vole à e cellule per ghjunghje à u so statu ottimale; più bassa hè a so temperatura, più tempu ci vole.
Sè tutti sti fattori cambianu cù u tempu, aumenteranu ancu a variabilità trà l'esperimenti. Hè necessariu minimizà ste fluttuazioni di temperatura, ancu s'ellu ùn hè micca sempre pussibule di cuntrullà tuttu (in particulare s'è parechje persone utilizanu a listessa incubatrice).
Cumu minimizà e variazioni di temperatura è riduce u tempu di ricuperazione di a temperatura
Preriscaldendu u mediu
Certi circadori sò abituati à preriscaldà buttiglie intere di terrenu in un bagnu d'acqua à 37 °C per purtà li à sta temperatura prima di l'usu. Hè ancu pussibule di preriscaldà u terrenu in un incubatore chì hè adupratu solu per u preriscaldamentu di u terrenu è micca per a cultura cellulare, induve u terrenu pò ghjunghje à una temperatura ottima senza disturbà e culture cellulari in un altru incubatore. Ma questu, per ciò chì sapemu, di solitu ùn hè micca una spesa accessibile.
Dentru à l'incubatore
Aprite a porta di l'incubatore u menu pussibule è chjudetela u più prestu pussibule. Evitate i punti freddi, chì creanu differenze di temperatura in l'incubatore. Lasciate spaziu trà i fiaschi per permette à l'aria di circulà. I scaffali in l'incubatore ponu esse perforati. Questu permette una megliu distribuzione di u calore postu chì permette à l'aria di passà per i fori. Tuttavia, a presenza di fori pò purtà à differenze in a crescita cellulare, perchè ci hè una differenza di temperatura trà a zona cù i fori è a zona cù meta. Per queste ragioni, se i vostri esperimenti richiedenu una crescita assai uniforme di a cultura cellulare, pudete mette i fiaschi di cultura nantu à supporti metallici cù superfici di cuntattu più chjuche, chì di solitu ùn sò micca necessarii in a cultura cellulare di rutina.
Minimizà u tempu di trasfurmazione cellulare
Per minimizà u tempu passatu in u prucessu di trattamentu cellulare, avete bisognu di
- ▶ Urganizate tutti i materiali è l'arnesi necessarii prima di cumincià à travaglià.
- ▶ Travagliate rapidamente è senza intoppi, rivedendu i metudi sperimentali in anticipu in modu chì e vostre operazioni diventinu ripetitive è automatizate.
- ▶ Minimizà u cuntattu di i liquidi cù l'aria ambiente.
- ▶Mantene una temperatura costante in u laburatoriu di cultura cellulare induve travagliate.
Data di publicazione: 18 d'aostu 2023