Effett tal-varjazzjoni fit-temperatura fuq il-kultura taċ-ċelluli
It-temperatura hija parametru importanti fil-kultura taċ-ċelloli għaliex taffettwa r-riproduċibbiltà tar-riżultati. Bidliet fit-temperatura 'l fuq jew taħt is-37°C għandhom effett sinifikanti ħafna fuq il-kinetika tat-tkabbir taċ-ċelloli tal-mammiferi, simili għal dik taċ-ċelloli batteriċi. Bidliet fl-espressjoni tal-ġeni u modifiki fl-istruttura ċellulari, il-progressjoni taċ-ċiklu taċ-ċelloli, l-istabbiltà tal-mRNA jistgħu jiġu skoperti fiċ-ċelloli tal-mammiferi wara siegħa f'temperatura ta' 32ºC. Minbarra li jaffettwaw direttament it-tkabbir taċ-ċelloli, bidliet fit-temperatura jaffettwaw ukoll il-pH tal-mezz, peress li s-solubbiltà tas-CO2 tbiddel il-pH (il-pH jiżdied f'temperaturi aktar baxxi). Iċ-ċelloli tal-mammiferi kkultivati jistgħu jittolleraw tnaqqis sinifikanti fit-temperatura. Jistgħu jinħażnu f'temperatura ta' 4 °C għal diversi jiem u jistgħu jittolleraw l-iffriżar sa -196 °C (bl-użu ta' kundizzjonijiet xierqa). Madankollu, ma jistgħux jittolleraw temperaturi 'l fuq minn madwar 2 °C 'il fuq min-normal għal aktar minn ftit sigħat u jmutu malajr f'temperatura ta' 40 °C u 'l fuq. Biex tiġi żgurata r-riproduċibbiltà massima tar-riżultati, anke jekk iċ-ċelloli jgħixu, jeħtieġ li tingħata attenzjoni biex it-temperatura tinżamm kostanti kemm jista' jkun waqt l-inkubazzjoni u l-immaniġġjar taċ-ċelloli barra l-inkubatur.
Raġunijiet għal varjazzjonijiet fit-temperatura ġewwa l-inkubatur
Żgur li nnutajt li meta l-bieba tal-inkubatur tinfetaħ, it-temperatura tinżel malajr għall-valur issettjat ta’ 37 °C. B’mod ġenerali, it-temperatura terġa’ lura fi ftit minuti wara li tingħalaq il-bieba. Fil-fatt, il-kulturi statiċi jeħtieġu ħin biex jirkupraw għat-temperatura ssettjata fl-inkubatur. Numru ta’ fatturi jistgħu jaffettwaw il-ħin li tieħu biex kultura taċ-ċelluli terġa’ tikseb it-temperatura wara trattament barra l-inkubatur.Dawn il-fatturi jinkludu:
- ▶it-tul ta’ żmien li ċ-ċelloli ilhom barra mill-inkubatur
- ▶it-tip ta' flask li fih jitkabbru ċ-ċelloli (il-ġeometrija taffettwa t-trasferiment tas-sħana)
- ▶Numru ta' kontenituri fl-inkubatur.
- ▶Il-kuntatt dirett tal-fliexken mal-ixkaffa tal-azzar jaffettwa l-iskambju tas-sħana u l-veloċità li biha tintlaħaq it-temperatura ottimali, għalhekk huwa aħjar li jiġu evitati munzelli ta' fliexken u li kull kontenitur jitqiegħed
- ▶direttament fuq l-ixkaffa tal-inkubatur.
It-temperatura inizjali ta' kwalunkwe kontenitur u mezz ġdid użat se taffettwa wkoll il-ħin li jieħu ċ-ċelloli biex ikunu fl-istat ottimali tagħhom; iktar ma tkun baxxa t-temperatura tagħhom, iktar jieħu żmien.
Jekk dawn il-fatturi kollha jinbidlu maż-żmien, se jżidu wkoll il-varjabbiltà bejn l-esperimenti. Huwa neċessarju li dawn il-varjazzjonijiet fit-temperatura jiġu minimizzati, anke jekk mhux dejjem ikun possibbli li jiġi kkontrollat kollox (speċjalment jekk diversi persuni jkunu qed jużaw l-istess inkubatur).
Kif timminimizza l-varjazzjonijiet fit-temperatura u tnaqqas il-ħin ta' rkupru mit-temperatura
Billi ssaħħan minn qabel il-mezz
Xi riċerkaturi huma mdorrijin isaħħnu minn qabel fliexken sħaħ tal-mezz f'banju tal-ilma ta' 37 °C biex iġibuhom għal din it-temperatura qabel l-użu. Huwa wkoll possibbli li l-mezz jissaħħan minn qabel f'inkubatur li jintuża biss għat-tisħin minn qabel tal-mezz u mhux għall-kultura taċ-ċelloli, fejn il-mezz jista' jilħaq temperatura ottimali mingħajr ma jfixkel il-kulturi taċ-ċelloli f'inkubatur ieħor. Iżda dan, safejn nafu aħna, ġeneralment mhuwiex spiża affordabbli.
Ġewwa l-Inkubatur
Iftaħ il-bieba tal-inkubatur kemm jista' jkun ftit u agħlqu malajr kemm jista' jkun. Evita żoni kesħin, li joħolqu differenzi fit-temperatura fl-inkubatur. Ħalli spazju bejn il-fliexken biex l-arja tiċċirkola. L-ixkafef ġewwa l-inkubatur jistgħu jiġu mtaqqbin. Dan jippermetti distribuzzjoni aħjar tas-sħana peress li jippermetti li l-arja tgħaddi mit-toqob. Madankollu, il-preżenza ta' toqob tista' twassal għal differenzi fit-tkabbir taċ-ċelloli, għaliex hemm differenza fit-temperatura bejn iż-żona bit-toqob u ż-żona bil-meta. Għal dawn ir-raġunijiet, jekk l-esperimenti tiegħek jeħtieġu tkabbir uniformi ħafna tal-kultura taċ-ċelloli, tista' tpoġġi l-fliexken tal-kultura fuq appoġġi tal-metall b'uċuħ ta' kuntatt iżgħar, li ġeneralment mhumiex neċessarji fil-kultura taċ-ċelloli ta' rutina.
Minimizzazzjoni tal-Ħin tal-Ipproċessar taċ-Ċelloli
Biex timminimizza l-ħin imqatta' fil-proċess tat-trattament taċ-ċelloli, trid
- ▶Organizza l-materjali u l-għodda kollha meħtieġa qabel tibda taħdem.
- ▶Aħdem malajr u bla xkiel, billi tirrevedi l-metodi sperimentali minn qabel sabiex l-operazzjonijiet tiegħek isiru ripetittivi u awtomatizzati.
- ▶Imminimizza l-kuntatt tal-likwidi mal-arja ambjentali.
- ▶Żomm temperatura kostanti fil-laboratorju tal-kultura taċ-ċelloli fejn taħdem.
Ħin tal-posta: 18 ta' Awwissu 2023