中文
Effekt av temperaturvariation på cellkultur
Temperatur är en viktig parameter i cellkulturen eftersom den påverkar reproducerbarheten av resultaten. Temperaturförändringar över eller under 37 ° C har en mycket signifikant effekt på celltillväxtkinetiken hos däggdjursceller, liknande den för bakterieceller. Förändringar i genuttryck och modifieringar i cellstruktur, cellcykelprogression, mRNA -stabilitet kan detekteras i däggdjursceller efter en timme vid 32 ° C. Förutom att direkt påverkar celltillväxt påverkar temperaturförändringarna också medias pH, eftersom lösligheten för CO2 förändrar pH (pH ökar vid lägre temperaturer). Odlade däggdjursceller kan tolerera betydande temperaturminskning. De kan lagras vid 4 ° C under flera dagar och tål frysning till -196 ° C (med användning av lämpliga förhållanden). De tål emellertid inte temperaturen över cirka 2 ° C över det normala i mer än några timmar och kommer att dö snabbt vid 40 ° C och högre. För att säkerställa maximal reproducerbarhet av resultaten, även om cellerna överlever, måste man ta hand om att bibehålla temperaturen så konstant som möjligt under inkubationen och hanteringen av cellerna utanför inkubatorn.
Skälen till temperaturvariationer inuti inkubatorn
Du kommer att ha märkt att när inkubatordörren öppnas sjunker temperaturen snabbt till det inställda värdet 37 ° C. I allmänhet kommer temperaturen att återhämta sig inom några minuter efter att dörren är stängd. I själva verket behöver statiska kulturer tid för att återhämta sig till den inställda temperaturen i inkubatorn. Ett antal faktorer kan påverka den tid det tar för en cellkultur att återta temperaturen efter behandling utanför inkubatorn.Dessa faktorer inkluderar ：
- ▶ Hur lång tid cellerna har varit ur inkubatorn
- ▶ Den typ av kolv där cellerna odlas (geometri påverkar värmeöverföring)
- ▶ Antal containrar i inkubatorn.
- ▶ Direktkontakt av kolvarna med stålhyllan påverkar värmeväxlingen och hastigheten för att nå den optimala temperaturen, så det är bättre att undvika staplar av kolvar och placera varje fartyg
- ▶ direkt på inkubatorns hylla.
Den initiala temperaturen för alla färska behållare och media som används kommer också att påverka den tid det tar för cellerna att vara i deras optimala tillstånd; Ju lägre temperatur, desto längre tid tar det.
Om alla dessa faktorer förändras över tid kommer de också att öka variationen mellan experiment. Det är nödvändigt att minimera dessa temperaturfluktuationer, även om det inte alltid är möjligt att kontrollera allt (särskilt om flera personer använder samma inkubator).
Hur man minimerar temperaturvariationer och minskar temperaturåtervinningstiden
Genom att förvärma mediet
Vissa forskare är vana vid förvärmande hela flaskor media i ett vattenbad på 37 ° C för att få dem till denna temperatur före användning. Det är också möjligt att förvärma mediet i en inkubator som endast används för medium förvärmning och inte för cellkultur, där mediet kan nå en optimal temperatur utan att störa cellkulturerna i en annan inkubator. Men detta, så vitt vi vet, är vanligtvis inte en överkomlig kostnad.
Inuti inkubatorn
Öppna inkubatorten så lite som möjligt och stäng den så snabbt. Undvik kalla fläckar, som skapar temperaturskillnader i inkubatorn. Lämna utrymme mellan kolvarna så att luften kan cirkulera. Hyllorna inuti inkubatorn kan perforeras. Detta möjliggör bättre värmefördelning eftersom det gör att luft kan passera genom hålen. Närvaron av hål kan emellertid leda till skillnader i celltillväxt, eftersom det finns en temperaturskillnad mellan området med hål och området med meta. Av dessa skäl, om dina experiment kräver mycket enhetlig tillväxt av cellkulturen, kan du placera odlingskolvarna på metallstöd med mindre kontaktytor, som vanligtvis inte är nödvändiga i rutinmässig cellkultur.
Minimera cellbehandlingstiden
För att minimera tidens utgifter i cellbehandlingsprocessen måste du
- ▶ Organisera alla nödvändiga material och verktyg innan du börjar arbeta.
- ▶ Arbeta snabbt och smidigt, granska experimentella metoder i förväg så att din verksamhet blir repetitiva och automatiserade.
- ▶ Minimera kontakten med vätskor med omgivande luft.
- ▶ Håll en konstant temperatur i cellkulturlaboratoriet där du arbetar.
Inläggstid: augusti-2023