中文
ผลของการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิต่อการเพาะเลี้ยงเซลล์
อุณหภูมิเป็นพารามิเตอร์ที่สำคัญในการเพาะเลี้ยงเซลล์เนื่องจากมีผลต่อการทำซ้ำของผลลัพธ์ การเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิสูงกว่าหรือต่ำกว่า 37 ° C มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญอย่างมากต่อจลนพลศาสตร์การเจริญเติบโตของเซลล์ของเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมซึ่งคล้ายกับเซลล์แบคทีเรีย Changes in gene expression and modifications in cellular structure, cell cycle progression, mRNA stability can be detected in mammalian cells after one hour at 32ºC. In addition to directly affecting cell growth, changes in temperature also affect the pH of the media, as the solubility of CO2 alters the pH (pH increases at lower temperatures). เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่เพาะเลี้ยงสามารถทนต่ออุณหภูมิที่ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ สามารถเก็บไว้ที่ 4 ° C เป็นเวลาหลายวันและสามารถทนต่อการแช่แข็งได้ถึง -196 ° C (ใช้เงื่อนไขที่เหมาะสม) อย่างไรก็ตามพวกเขาไม่สามารถทนต่ออุณหภูมิสูงกว่าประมาณ 2 ° C สูงกว่าปกตินานกว่าสองสามชั่วโมงและจะตายอย่างรวดเร็วที่ 40 ° C ขึ้นไป To ensure maximum reproducibility of results, even if the cells survive, care needs to be taken to maintain the temperature as constant as possible during the incubation and handling of the cells outside the incubator.
เหตุผลสำหรับการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิภายในศูนย์บ่มเพาะ
คุณจะสังเกตเห็นว่าเมื่อเปิดประตูศูนย์บ่มเพาะอุณหภูมิจะลดลงอย่างรวดเร็วถึงค่าที่กำหนดไว้ที่ 37 ° C โดยทั่วไปอุณหภูมิจะฟื้นตัวภายในไม่กี่นาทีหลังจากปิดประตู ในความเป็นจริงวัฒนธรรมคงที่ต้องใช้เวลาในการกู้คืนอุณหภูมิที่ตั้งไว้ในตู้อบ ปัจจัยหลายประการอาจส่งผลกระทบต่อเวลาที่ใช้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์เพื่อฟื้นอุณหภูมิหลังการรักษานอกศูนย์บ่มเพาะปัจจัยเหล่านี้รวมถึง：
- ▶ระยะเวลาที่เซลล์ออกจากศูนย์บ่มเพาะ
- ▶ชนิดของขวดที่เซลล์ปลูก (เรขาคณิตมีผลต่อการถ่ายเทความร้อน)
- ▶จำนวนคอนเทนเนอร์ในศูนย์บ่มเพาะ
- ▶โดยตรงบนชั้นวางของศูนย์บ่มเพาะ
อุณหภูมิเริ่มต้นของภาชนะบรรจุสดและสื่อที่ใช้จะส่งผลกระทบต่อเวลาที่เซลล์จะอยู่ในสถานะที่เหมาะสมที่สุด ยิ่งอุณหภูมิต่ำลงเท่าไหร่ก็ยิ่งใช้เวลานานขึ้นเท่านั้น
หากปัจจัยทั้งหมดเหล่านี้เปลี่ยนแปลงไปตามกาลเวลาพวกเขาจะเพิ่มความแปรปรวนระหว่างการทดลอง It is necessary to minimize these temperature fluctuations, even if it is not always possible to control everything (especially if several people are using the same incubator).
วิธีลดความแปรปรวนของอุณหภูมิและลดเวลาในการกู้คืนอุณหภูมิ
โดยการอุ่นสื่อกลาง
นักวิจัยบางคนคุ้นเคยกับการอุ่นขวดทั้งขวดในอ่างน้ำ 37 ° C เพื่อนำพวกเขาไปที่อุณหภูมินี้ก่อนการใช้งาน It is also possible to preheat the medium in an incubator that is only used for medium preheating and not for cell culture, where the medium can reach an optimal temperature without disturbing the cell cultures in another incubator. แต่เท่าที่เรารู้มักจะไม่ใช่ค่าใช้จ่ายที่เหมาะสม
ภายในศูนย์บ่มเพาะ
เปิดประตูศูนย์บ่มเพาะให้น้อยที่สุดและปิดอย่างรวดเร็ว หลีกเลี่ยงจุดเย็นซึ่งสร้างความแตกต่างของอุณหภูมิในศูนย์บ่มเพาะ เว้นช่องว่างระหว่างขวดเพื่อให้อากาศไหลเวียน ชั้นวางภายในตู้อบสามารถเจาะรูได้ สิ่งนี้ช่วยให้การกระจายความร้อนดีขึ้นเนื่องจากช่วยให้อากาศผ่านรู However, the presence of holes can lead to differences in cell growth, because there is a temperature difference between the area with holes and the area with meta. For these reasons, if your experiments require highly uniform growth of the cell culture, you can place the culture flasks on metal supports with smaller contact surfaces, which are usually not necessary in routine cell culture.
ลดเวลาในการประมวลผลเซลล์
เพื่อลดเวลาที่ใช้ในกระบวนการรักษาเซลล์คุณต้องลด
- ▶จัดระเบียบวัสดุและเครื่องมือที่จำเป็นทั้งหมดก่อนที่จะเริ่มทำงาน
- ▶ทำงานได้อย่างรวดเร็วและราบรื่นตรวจสอบวิธีการทดลองล่วงหน้าเพื่อให้การดำเนินการของคุณซ้ำซากและอัตโนมัติ
- ▶ลดการสัมผัสของเหลวด้วยอากาศโดยรอบ
- ▶รักษาอุณหภูมิคงที่ในห้องปฏิบัติการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่คุณทำงาน
เวลาโพสต์: ส.ค. 18-2023