Efiko de temperaturvario sur ĉelkulturo
Temperaturo estas grava parametro en ĉelkulturo ĉar ĝi influas la reprodukteblecon de rezultoj. Temperaturŝanĝoj super aŭ sub 37 °C havas tre signifan efikon sur la ĉelkreskan kinetikon de mamulaj ĉeloj, simile al tiu de bakteriaj ĉeloj. Ŝanĝoj en genekspresio kaj modifoj en ĉela strukturo, ĉelcikla progresado, mRNA-stabileco povas esti detektitaj en mamulaj ĉeloj post unu horo je 32 °C. Aldone al rekta influo de ĉelkresko, temperaturŝanĝoj ankaŭ influas la pH de la medio, ĉar la solvebleco de CO2 ŝanĝas la pH (pH pliiĝas je pli malaltaj temperaturoj). Kulturitaj mamulaj ĉeloj povas toleri signifajn temperaturmalkreskojn. Ili povas esti konservitaj je 4 °C dum pluraj tagoj kaj povas toleri frostigon ĝis -196 °C (uzante taŭgajn kondiĉojn). Tamen, ili ne povas toleri temperaturojn super ĉirkaŭ 2 °C super la normalo dum pli ol kelkaj horoj kaj mortos rapide je 40 °C kaj pli. Por certigi maksimuman reprodukteblecon de rezultoj, eĉ se la ĉeloj postvivas, oni devas zorgi konservi la temperaturon kiel eble plej konstanta dum la inkubacio kaj manipulado de la ĉeloj ekster la inkubatoro.
Kialoj de temperaturŝanĝiĝoj ene de la inkubatoro
Vi rimarkis, ke kiam la inkubatora pordo malfermiĝas, la temperaturo rapide falas al la fiksita valoro de 37 °C. Ĝenerale, la temperaturo restariĝas post kelkaj minutoj post la fermo de la pordo. Fakte, senmovaj kulturoj bezonas tempon por restariĝi al la fiksita temperaturo en la inkubatoro. Kelkaj faktoroj povas influi la tempon necesan por ke ĉelkulturo reakiru temperaturon post traktado ekster la inkubatoro.Ĉi tiuj faktoroj inkluzivas:
- ▶ la daŭro de la tempo, dum kiu la ĉeloj estis ekster la inkubatoro
- ▶la tipo de flakono en kiu la ĉeloj estas kreskigitaj (geometrio influas varmotransigon)
- ▶Nombro da ujoj en la inkubatoro.
- ▶Rekta kontakto de la flakonoj kun la ŝtala breto influas la varmointerŝanĝon kaj la rapidecon de atingado de la optimuma temperaturo, do estas pli bone eviti stakojn de flakonoj kaj meti ĉiun ujon
- ▶rekte sur la breto de la inkubatoro.
La komenca temperaturo de iuj ajn freŝaj ujoj kaj uzitaj medioj ankaŭ influos la tempon necesan por ke la ĉeloj atingu sian optimuman staton; ju pli malalta ilia temperaturo, des pli longe ĝi daŭras.
Se ĉiuj ĉi tiuj faktoroj ŝanĝiĝas laŭlonge de la tempo, ili ankaŭ pliigos la ŝanĝiĝemon inter eksperimentoj. Necesas minimumigi ĉi tiujn temperaturfluktuojn, eĉ se ne ĉiam eblas kontroli ĉion (precipe se pluraj homoj uzas la saman inkubatoron).
Kiel minimumigi temperaturŝanĝiĝojn kaj redukti temperaturresaniĝan tempon
Per antaŭvarmigado de la medio
Kelkaj esploristoj kutimas antaŭvarmigi tutajn botelojn da medio en akvobano je 37 °C por alporti ilin al tiu temperaturo antaŭ uzo. Eblas ankaŭ antaŭvarmigi la medion en inkubatoro, kiu estas uzata nur por antaŭvarmigo de la medio kaj ne por ĉelkultivado, kie la medio povas atingi optimuman temperaturon sen ĝeni la ĉelkulturojn en alia inkubatoro. Sed tio, laŭ nia scio, kutime ne estas pagebla elspezo.
Ene de la Inkubatoro
Malfermu la pordon de la inkubatoro kiel eble plej malmulte kaj fermu ĝin kiel eble plej rapide. Evitu malvarmajn punktojn, kiuj kreas temperaturdiferencojn en la inkubatoro. Lasu spacon inter la flakonoj por permesi al aero cirkuli. La bretoj interne de la inkubatoro povas esti truitaj. Tio permesas pli bonan varmodistribuon, ĉar ĝi permesas al aero pasi tra la truoj. Tamen, la ĉeesto de truoj povas konduki al diferencoj en ĉelkresko, ĉar ekzistas temperaturdiferenco inter la areo kun truoj kaj la areo kun meta-truoj. Pro ĉi tiuj kialoj, se viaj eksperimentoj postulas tre unuforman kreskon de la ĉelkulturo, vi povas meti la kulturflakonojn sur metalajn subtenilojn kun pli malgrandaj kontaktaj surfacoj, kiuj kutime ne estas necesaj en rutina ĉelkulturo.
Minimumigante Ĉelan Prilaboran Tempon
Por minimumigi la tempon elspezitan en la ĉeltraktado, vi devas
- ▶Organizu ĉiujn necesajn materialojn kaj ilojn antaŭ ol vi komencos labori.
- ▶Laboru rapide kaj glate, anticipe reviziante eksperimentajn metodojn por ke viaj operacioj fariĝu ripetaj kaj aŭtomatigitaj.
- ▶Minimumigu kontakton de likvaĵoj kun ĉirkaŭa aero.
- ▶Konservu konstantan temperaturon en la ĉelkultura laboratorio, kie vi laboras.
Afiŝtempo: 18-a de aŭgusto 2023