세포 배양에 대한 온도 변화의 영향
온도는 결과의 재현성에 영향을 미치기 때문에 세포 배양에서 중요한 매개변수입니다. 37°C 이상 또는 이하의 온도 변화는 박테리아 세포와 마찬가지로 포유류 세포의 세포 성장 속도에 매우 중요한 영향을 미칩니다. 포유류 세포는 32°C에서 1시간 배양 후 유전자 발현 변화, 세포 구조 변형, 세포 주기 진행, mRNA 안정성 변화를 확인할 수 있습니다. 온도 변화는 세포 성장에 직접적인 영향을 미칠 뿐만 아니라, 이산화탄소의 용해도가 배지의 pH를 변화시키므로(낮은 온도에서는 pH가 증가) 배지의 pH에도 영향을 미칩니다. 배양된 포유류 세포는 상당한 온도 감소를 견딜 수 있습니다. 4°C에서 며칠 동안 보관할 수 있으며, 적절한 조건 하에서 -196°C까지의 동결도 견딜 수 있습니다. 그러나 정상 온도보다 약 2°C 높은 온도에서는 몇 시간 이상 견딜 수 없으며, 40°C 이상에서는 빠르게 사멸합니다. 결과의 재현성을 최대화하려면 세포가 살아남더라도 배양 중 및 배양기 외부에서 세포를 다루는 동안 온도를 가능한 한 일정하게 유지해야 합니다.
인큐베이터 내부 온도 변화의 원인
인큐베이터 문을 열면 온도가 설정 온도인 37°C까지 빠르게 떨어지는 것을 보셨을 것입니다. 일반적으로 문을 닫으면 몇 분 안에 온도가 회복됩니다. 실제로 정적 배양은 인큐베이터 내 설정 온도까지 회복하는 데 시간이 필요합니다. 인큐베이터 외부에서 처리한 후 세포 배양액의 온도가 회복되는 데 걸리는 시간에는 여러 요인이 영향을 미칠 수 있습니다.이러한 요소에는 다음이 포함됩니다.
- ▶세포가 배양기 밖에 있었던 시간
- ▶세포가 자라는 플라스크의 종류(기하학적 구조는 열전달에 영향을 미침)
- ▶인큐베이터에 있는 용기의 수.
- ▶플라스크와 철제 선반이 직접 접촉하면 열교환과 최적온도 도달 속도에 영향을 미치므로 플라스크를 쌓아두는 것은 피하고, 각 용기를 철제 선반에 하나씩 배치하는 것이 좋다.
- ▶인큐베이터 선반 위에 바로 놓으세요.
신선한 용기와 사용하는 배지의 초기 온도도 세포가 최적 상태에 도달하는 데 걸리는 시간에 영향을 미칩니다. 온도가 낮을수록, 도달하는 데 걸리는 시간은 더 길어집니다.
이러한 모든 요소가 시간이 지남에 따라 변하면 실험 간 변동성도 증가합니다. 모든 것을 항상 제어할 수는 없더라도 (특히 여러 사람이 같은 인큐베이터를 사용하는 경우) 이러한 온도 변동을 최소화하는 것이 중요합니다.
온도 변화를 최소화하고 온도 회복 시간을 단축하는 방법
매체를 예열하여
일부 연구자들은 사용하기 전에 배지병 전체를 37°C 수조에서 예열하여 이 온도에 맞추는 데 익숙합니다. 또한, 세포 배양이 아닌 배지 예열 전용 인큐베이터에서 배지를 예열하는 방법도 있습니다. 이렇게 하면 다른 인큐베이터의 세포 배양에 영향을 주지 않고 배지가 최적의 온도에 도달할 수 있습니다. 하지만 우리가 아는 한 이는 일반적으로 감당할 수 있는 비용이 아닙니다.
인큐베이터 내부
인큐베이터 문은 가능한 한 적게 열고 빠르게 닫으세요. 인큐베이터 내 온도 차이를 유발하는 차가운 부분은 피하세요. 플라스크 사이에 공간을 두어 공기가 순환할 수 있도록 하세요. 인큐베이터 내부 선반에는 구멍을 뚫을 수 있습니다. 구멍을 통해 공기가 통과하여 열 분배가 더 잘 됩니다. 하지만 구멍이 있으면 구멍이 있는 부분과 금속 부분이 있는 부분 사이에 온도 차이가 발생하여 세포 성장에 차이가 생길 수 있습니다. 이러한 이유로, 실험에서 세포 배양의 균일한 성장이 필요한 경우, 접촉면이 작은 금속 지지대에 배양 플라스크를 놓을 수 있습니다. 일반적인 세포 배양에는 이러한 지지대가 필요하지 않습니다.
세포 처리 시간 최소화
세포 처리 과정에서 소요되는 시간을 최소화하려면 다음이 필요합니다.
- ▶작업을 시작하기 전에 필요한 모든 재료와 도구를 정리하세요.
- ▶실험적 방법을 미리 검토하여 작업을 반복적이고 자동화하여 빠르고 원활하게 작업합니다.
- ▶액체와 주변 공기의 접촉을 최소화하세요.
- ▶작업하는 세포 배양 실험실에서는 일정한 온도를 유지하세요.
게시 시간: 2023년 8월 18일