Temperatūros kitimo įtaka ląstelių kultūrai
Temperatūra yra svarbus ląstelių kultūros parametras, nes ji turi įtakos rezultatų atkuriamumui. Temperatūros pokyčiai, viršijantys arba žemiau 37 °C, turi labai didelę įtaką žinduolių ląstelių augimo kinetikai, panašiai kaip ir bakterijų ląstelių. Žinduolių ląstelėse po valandos 32 °C temperatūroje galima aptikti genų raiškos pokyčius ir ląstelių struktūros modifikacijas, ląstelių ciklo progresavimą, mRNR stabilumą. Be tiesioginės įtakos ląstelių augimui, temperatūros pokyčiai taip pat turi įtakos terpės pH, nes CO2 tirpumas keičia pH (pH didėja esant žemesnei temperatūrai). Kultūrinės žinduolių ląstelės gali toleruoti reikšmingą temperatūros sumažėjimą. Jas galima laikyti 4 °C temperatūroje kelias dienas ir jos gali toleruoti užšalimą iki -196 °C (naudojant tinkamas sąlygas). Tačiau jos negali toleruoti aukštesnės nei maždaug 2 °C temperatūros virš normalios ilgiau nei kelias valandas ir greitai žūsta 40 °C ir aukštesnėje temperatūroje. Siekiant užtikrinti maksimalų rezultatų atkuriamumą, net jei ląstelės išgyvena, inkubacijos ir ląstelių tvarkymo už inkubatoriaus ribų metu reikia stengtis palaikyti kuo pastovesnę temperatūrą.
Temperatūros svyravimų inkubatoriuje priežastys
Turbūt pastebėjote, kad atidarius inkubatoriaus duris, temperatūra greitai nukrenta iki nustatytos 37 °C vertės. Paprastai temperatūra atsistato per kelias minutes po durų uždarymo. Iš tiesų, statinėms kultūroms reikia laiko, kad inkubatoriuje atsigautų iki nustatytos temperatūros. Laiką, per kurį ląstelių kultūra atgauna temperatūrą po apdorojimo už inkubatoriaus ribų, gali paveikti daug veiksnių.Šie veiksniai apima:
- ▶laikas, kurį ląstelės buvo išimtos iš inkubatoriaus
- ▶kolbos, kurioje auginamos ląstelės, tipas (geometrija turi įtakos šilumos perdavimui)
- ▶Inkubatoriuje esančių konteinerių skaičius.
- ▶Tiesioginis kolbų sąlytis su plienine lentyna turi įtakos šilumos mainams ir optimalios temperatūros pasiekimo greičiui, todėl geriau vengti kolbų krūvelių ir kiekvieną indą dėti
- ▶tiesiai ant inkubatoriaus lentynos.
Pradinė bet kokių naudojamų šviežių talpyklų ir terpės temperatūra taip pat turės įtakos laikui, per kurį ląstelės pasieks optimalią būseną; kuo žemesnė jų temperatūra, tuo ilgiau tai užtrunka.
Jei visi šie veiksniai laikui bėgant keisis, jie taip pat padidins kintamumą tarp eksperimentų. Būtina kuo labiau sumažinti šiuos temperatūros svyravimus, net jei ne visada įmanoma viską kontroliuoti (ypač jei keli žmonės naudoja tą patį inkubatorių).
Kaip sumažinti temperatūros svyravimus ir sutrumpinti temperatūros atsigavimo laiką
Iš anksto pašildžius terpę
Kai kurie tyrėjai įpratę prieš naudojimą pašildyti ištisus terpės buteliukus 37 °C vandens vonelėje, kad jie pasiektų šią temperatūrą. Taip pat galima pašildyti terpę inkubatoriuje, kuris naudojamas tik terpės pašildymui, o ne ląstelių kultūroms, tokiu būdu terpė gali pasiekti optimalią temperatūrą netrikdydama ląstelių kultūrų kitame inkubatoriuje. Tačiau, kiek mums žinoma, tai paprastai nėra įperkama kaina.
Inkubatoriaus viduje
Inkubatoriaus dureles atidarykite kuo rečiau ir uždarykite jas kuo greičiau. Venkite šaltų vietų, kurios inkubatoriuje sukuria temperatūros skirtumus. Palikite tarp kolbų tarpą, kad oras galėtų cirkuliuoti. Inkubatoriaus viduje esančios lentynos gali būti perforuotos. Tai leidžia geriau paskirstyti šilumą, nes oras gali praeiti pro skylutes. Tačiau skylučių buvimas gali lemti ląstelių augimo skirtumus, nes yra temperatūros skirtumas tarp srities su skylutėmis ir srities su metamorfoze. Dėl šių priežasčių, jei jūsų eksperimentams reikalingas labai tolygus ląstelių kultūros augimas, galite dėti kultūros kolbas ant metalinių laikiklių su mažesniais sąlyčio paviršiais, kurie paprastai nėra būtini įprastoje ląstelių kultūroje.
Ląstelių apdorojimo laiko sutrumpinimas
Norint sumažinti ląstelių apdorojimo proceso laiką, reikia
- ▶ Prieš pradėdami darbą, sutvarkykite visas reikalingas medžiagas ir įrankius.
- ▶Dirbkite greitai ir sklandžiai, iš anksto peržiūrėdami eksperimentinius metodus, kad jūsų operacijos taptų pasikartojančios ir automatizuotos.
- ▶ Sumažinkite skysčių sąlytį su aplinkos oru.
- ▶ Palaikykite pastovią temperatūrą ląstelių kultūros laboratorijoje, kurioje dirbate.
Įrašo laikas: 2023 m. rugpjūčio 18 d.