中文
Effect van temperatuurvariatie op celkweek
Temperatuur is een belangrijke parameter in de celkweek omdat het de reproduceerbaarheid van resultaten beïnvloedt. Temperatuurveranderingen boven of onder 37 ° C hebben een zeer significant effect op de celgroeiminetiek van zoogdiercellen, vergelijkbaar met die van bacteriecellen. Veranderingen in genexpressie en modificaties in cellulaire structuur, celcyclusprogressie, mRNA -stabiliteit kan na een uur bij 32 ° C worden gedetecteerd in zoogdiercellen. Naast het direct beïnvloeden van de celgroei, beïnvloeden veranderingen in temperatuur ook de pH van de media, omdat de oplosbaarheid van CO2 de pH verandert (pH toeneemt bij lagere temperaturen). Gekweekte zoogdiercellen kunnen een significante temperatuurverlies verdragen. Ze kunnen meerdere dagen bij 4 ° C worden bewaard en kunnen bevriezing verdragen tot -196 ° C (met behulp van de juiste omstandigheden). Ze kunnen echter geen temperaturen boven 2 ° C boven normaal verdragen gedurende meer dan een paar uur en zullen snel sterven bij 40 ° C en hoger. Om de maximale reproduceerbaarheid van de resultaten te garanderen, zelfs als de cellen overleven, moet er zorgen worden om de temperatuur zo constant mogelijk te behouden tijdens de incubatie en hantering van de cellen buiten de incubator.
Redenen voor temperatuurvariaties in de incubator
U zult hebben gemerkt dat wanneer de incubator -deur wordt geopend, de temperatuur snel daalt tot de ingestelde waarde van 37 ° C. Over het algemeen zal de temperatuur binnen enkele minuten nadat de deur is gesloten, herstelt. Statische culturen hebben zelfs tijd nodig om te herstellen naar de ingestelde temperatuur in de incubator. Een aantal factoren kan de tijd beïnvloeden die een celkweek nodig heeft om de temperatuur na behandeling buiten de incubator te herwinnen.Deze factoren omvatten ：
- ▶ De tijdsduur die de cellen uit de incubator zijn geweest
- ▶ Het type kolf waarin de cellen worden gekweekt (geometrie beïnvloedt warmteoverdracht)
- ▶ Aantal containers in de incubator.
- ▶ Direct contact van de kolven met de stalen plank beïnvloedt de warmte -uitwisseling en de snelheid van het bereiken van de optimale temperatuur, dus het is beter om stapels kolven te vermijden en elk vat te plaatsen
- ▶ Direct op de plank van de incubator.
De begintemperatuur van gebruikte verse containers en media heeft ook invloed op de tijd die de cellen nodig hebben om zich in hun optimale toestand te bevinden; Hoe lager hun temperatuur, hoe langer het duurt.
Als al deze factoren in de loop van de tijd veranderen, zullen ze ook de variabiliteit tussen experimenten verhogen. Het is noodzakelijk om deze temperatuurschommelingen te minimaliseren, zelfs als het niet altijd mogelijk is om alles te regelen (vooral als meerdere mensen dezelfde incubator gebruiken).
Hoe de temperatuurvariaties te minimaliseren en de hersteltijd van de temperatuur te verminderen
Door het medium voor te verwarmen
Sommige onderzoekers zijn gewend om hele flessen media in een waterbad van 37 ° C in een waterbad van 37 ° C om ze vóór gebruik op deze temperatuur te brengen. Het is ook mogelijk om het medium voor te verwarmen in een incubator die alleen wordt gebruikt voor medium voorverwarming en niet voor celkweek, waarbij het medium een optimale temperatuur kan bereiken zonder de celculturen in een andere incubator te verstoren. Maar dit is, voor zover we weten, meestal geen betaalbare kosten.
In de incubator
Open de incubator -deur zo min mogelijk en sluit deze zo snel. Vermijd koude vlekken, die temperatuurverschillen in de incubator creëren. Laat ruimte tussen de kolven om lucht te laten circuleren. De planken in de incubator kunnen worden geperforeerd. Dit zorgt voor een betere warmteverdeling, omdat het lucht door de gaten kan passeren. De aanwezigheid van gaten kan echter leiden tot verschillen in celgroei, omdat er een temperatuurverschil is tussen het gebied met gaten en het gebied met meta. Om deze redenen, als uw experimenten een zeer uniforme groei van de celkweek vereisen, kunt u de kweekkolven op metaalsteunen plaatsen met kleinere contactoppervlakken, die meestal niet nodig zijn in routinematige celkweek.
Het minimaliseren van celverwerkingstijd
Om de tijd te minimaliseren die in celbehandelingsproces worden besteed, moet u
- ▶ Organiseer alle benodigde materialen en gereedschappen voordat u begint te werken.
- ▶ Werk snel en soepel en beoordeel van tevoren experimentele methoden zodat uw bewerkingen repetitief en geautomatiseerd worden.
- ▶ Minimaliseer het contact van vloeistoffen met omgevingslucht.
- ▶ Behoud een constante temperatuur in het celkweeklab waar u werkt.
Posttijd: augustus-18-2023