中文
Pengaruh variasi suhu pada kultur sel
Suhu adalah parameter penting dalam kultur sel karena mempengaruhi reproduktifitas hasil. Perubahan suhu di atas atau di bawah 37 ° C memiliki efek yang sangat signifikan pada kinetika pertumbuhan sel sel mamalia, mirip dengan sel bakteri. Perubahan ekspresi gen dan modifikasi dalam struktur seluler, perkembangan siklus sel, stabilitas mRNA dapat dideteksi dalam sel mamalia setelah satu jam pada 32ºC. Selain secara langsung mempengaruhi pertumbuhan sel, perubahan suhu juga mempengaruhi pH media, karena kelarutan CO2 mengubah pH (pH meningkat pada suhu yang lebih rendah). Sel -sel mamalia yang dikultur dapat mentolerir suhu yang signifikan berkurang. Mereka dapat disimpan pada suhu 4 ° C selama beberapa hari dan dapat mentolerir pembekuan hingga -196 ° C (menggunakan kondisi yang sesuai). Namun, mereka tidak dapat mentolerir suhu di atas sekitar 2 ° C di atas normal selama lebih dari beberapa jam dan akan mati dengan cepat pada suhu 40 ° C dan di atas. Untuk memastikan reproduktifitas hasil maksimum, bahkan jika sel bertahan, perawatan perlu diambil untuk mempertahankan suhu se -konstan mungkin selama inkubasi dan penanganan sel di luar inkubator.
Alasan variasi suhu di dalam inkubator
Anda akan memperhatikan bahwa ketika pintu inkubator dibuka, suhu turun dengan cepat ke nilai yang ditetapkan 37 ° C. Secara umum, suhu akan pulih dalam beberapa menit setelah pintu ditutup. Faktanya, kultur statis perlu waktu untuk pulih ke suhu yang ditetapkan dalam inkubator. Sejumlah faktor dapat mempengaruhi waktu yang diperlukan untuk kultur sel untuk mendapatkan kembali suhu setelah perawatan di luar inkubator.Faktor -faktor ini termasuk ：
- ▶ Lamanya waktu sel telah keluar dari inkubator
- ▶ Jenis labu di mana sel ditumbuhkan (geometri mempengaruhi perpindahan panas)
- ▶ Jumlah wadah dalam inkubator.
- ▶ Kontak langsung labu dengan rak baja mempengaruhi pertukaran panas dan kecepatan mencapai suhu optimal, jadi lebih baik untuk menghindari tumpukan labu dan untuk menempatkan setiap kapal
- ▶ Langsung di rak inkubator.
Suhu awal dari setiap wadah segar dan media yang digunakan juga akan mempengaruhi waktu yang dibutuhkan sel untuk berada pada keadaan optimal mereka; Semakin rendah suhu mereka, semakin lama waktu yang dibutuhkan.
Jika semua faktor ini berubah dari waktu ke waktu, mereka juga akan meningkatkan variabilitas antara eksperimen. Penting untuk meminimalkan fluktuasi suhu ini, bahkan jika tidak selalu mungkin untuk mengendalikan semuanya (terutama jika beberapa orang menggunakan inkubator yang sama).
Cara meminimalkan variasi suhu dan mengurangi waktu pemulihan suhu
Dengan memanaskan medium
Beberapa peneliti terbiasa dengan seluruh botol media pra-pemanasan dalam penangas air 37 ° C untuk membawanya ke suhu ini sebelum digunakan. Dimungkinkan juga untuk memanaskan medium dalam inkubator yang hanya digunakan untuk pemanasan sebelumnya dan bukan untuk kultur sel, di mana media dapat mencapai suhu optimal tanpa mengganggu kultur sel di inkubator lain. Tapi ini, sejauh yang kita tahu, biasanya bukan biaya yang terjangkau.
Di dalam inkubator
Buka pintu inkubator sesedikit mungkin dan tutup dengan cepat. Hindari bintik -bintik dingin, yang menciptakan perbedaan suhu dalam inkubator. Biarkan ruang di antara labu untuk memungkinkan udara bersirkulasi. Rak -rak di dalam inkubator dapat dilubangi. Ini memungkinkan distribusi panas yang lebih baik karena memungkinkan udara melewati lubang. Namun, keberadaan lubang dapat menyebabkan perbedaan dalam pertumbuhan sel, karena ada perbedaan suhu antara area dengan lubang dan area dengan meta. Untuk alasan ini, jika percobaan Anda membutuhkan pertumbuhan kultur sel yang sangat seragam, Anda dapat menempatkan labu kultur pada penyangga logam dengan permukaan kontak yang lebih kecil, yang biasanya tidak diperlukan dalam kultur sel rutin.
Meminimalkan waktu pemrosesan sel
Untuk meminimalkan waktu yang dihabiskan dalam proses perawatan sel, Anda perlu
- ▶ Atur semua bahan dan alat yang diperlukan sebelum Anda mulai bekerja.
- ▶ Bekerja dengan cepat dan lancar, meninjau metode eksperimental terlebih dahulu sehingga operasi Anda menjadi berulang dan otomatis.
- ▶ Minimalkan kontak cairan dengan udara sekitar.
- ▶ Pertahankan suhu konstan di lab kultur sel tempat Anda bekerja.
Waktu posting: Aug-18-2023