Pengaruh variasi suhu pada kultur sel
Suhu merupakan parameter penting dalam kultur sel karena memengaruhi reproduksibilitas hasil. Perubahan suhu di atas atau di bawah 37°C memiliki efek yang sangat signifikan pada kinetika pertumbuhan sel mamalia, mirip dengan sel bakteri. Perubahan ekspresi gen dan modifikasi struktur seluler, perkembangan siklus sel, stabilitas mRNA dapat dideteksi dalam sel mamalia setelah satu jam pada suhu 32ºC. Selain memengaruhi pertumbuhan sel secara langsung, perubahan suhu juga memengaruhi pH media, karena kelarutan CO2 mengubah pH (pH meningkat pada suhu yang lebih rendah). Sel mamalia yang dikultur dapat mentoleransi penurunan suhu yang signifikan. Sel tersebut dapat disimpan pada suhu 4 °C selama beberapa hari dan dapat mentoleransi pembekuan hingga -196 °C (dengan menggunakan kondisi yang sesuai). Namun, sel tersebut tidak dapat mentoleransi suhu di atas sekitar 2 °C di atas normal selama lebih dari beberapa jam dan akan cepat mati pada suhu 40 °C ke atas. Untuk memastikan reproduktifitas hasil yang maksimal, bahkan jika sel-sel tersebut bertahan hidup, kehati-hatian perlu dilakukan untuk menjaga suhu tetap konstan selama inkubasi dan penanganan sel di luar inkubator.
Alasan terjadinya variasi suhu di dalam inkubator
Anda akan melihat bahwa saat pintu inkubator dibuka, suhu turun dengan cepat ke nilai yang ditetapkan yaitu 37 °C. Secara umum, suhu akan pulih dalam beberapa menit setelah pintu ditutup. Faktanya, kultur statis memerlukan waktu untuk pulih ke suhu yang ditetapkan di dalam inkubator. Sejumlah faktor dapat memengaruhi waktu yang dibutuhkan kultur sel untuk mendapatkan kembali suhu setelah perawatan di luar inkubator.Faktor-faktor tersebut antara lain:
- ▶lamanya sel berada di luar inkubator
- ▶jenis labu tempat sel tumbuh (geometri mempengaruhi perpindahan panas)
- ▶Jumlah wadah dalam inkubator.
- ▶Kontak langsung labu dengan rak baja mempengaruhi pertukaran panas dan kecepatan mencapai suhu optimal, jadi lebih baik hindari tumpukan labu dan letakkan setiap bejana
- ▶langsung di rak inkubator.
Suhu awal wadah dan media baru yang digunakan juga akan memengaruhi waktu yang dibutuhkan sel untuk berada pada kondisi optimalnya; semakin rendah suhunya, semakin lama waktu yang dibutuhkan.
Jika semua faktor ini berubah seiring waktu, variabilitas antar eksperimen juga akan meningkat. Fluktuasi suhu ini perlu diminimalkan, meskipun tidak selalu mungkin untuk mengendalikan semuanya (terutama jika beberapa orang menggunakan inkubator yang sama).
Cara meminimalkan variasi suhu dan mengurangi waktu pemulihan suhu
Dengan memanaskan terlebih dahulu media
Beberapa peneliti terbiasa memanaskan seluruh botol media dalam air bersuhu 37 °C untuk mencapai suhu tersebut sebelum digunakan. Dimungkinkan juga untuk memanaskan media dalam inkubator yang hanya digunakan untuk pemanasan awal media dan bukan untuk kultur sel, di mana media dapat mencapai suhu optimal tanpa mengganggu kultur sel dalam inkubator lain. Namun, sejauh yang kami ketahui, hal ini biasanya bukan biaya yang terjangkau.
Di Dalam Inkubator
Buka pintu inkubator sesedikit mungkin dan tutup secepat mungkin. Hindari tempat yang dingin, yang menciptakan perbedaan suhu di dalam inkubator. Sisakan ruang di antara tabung reaksi untuk memungkinkan udara bersirkulasi. Rak di dalam inkubator dapat dilubangi. Hal ini memungkinkan distribusi panas yang lebih baik karena memungkinkan udara melewati lubang-lubang. Namun, keberadaan lubang dapat menyebabkan perbedaan dalam pertumbuhan sel, karena ada perbedaan suhu antara area berlubang dan area dengan meta. Karena alasan ini, jika percobaan Anda memerlukan pertumbuhan kultur sel yang sangat seragam, Anda dapat menempatkan tabung reaksi kultur pada penyangga logam dengan permukaan kontak yang lebih kecil, yang biasanya tidak diperlukan dalam kultur sel rutin.
Meminimalkan Waktu Pemrosesan Sel
Untuk meminimalkan waktu yang dihabiskan dalam proses perawatan sel, Anda perlu
- ▶Siapkan semua bahan dan alat yang diperlukan sebelum Anda mulai bekerja.
- ▶Bekerja dengan cepat dan lancar, meninjau metode eksperimen terlebih dahulu sehingga operasi Anda menjadi berulang dan otomatis.
- ▶Minimalkan kontak cairan dengan udara sekitar.
- ▶Pertahankan suhu konstan di laboratorium kultur sel tempat Anda bekerja.
Waktu posting: 18-Agu-2023