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Efeito da variação de temperatura na cultura de células
A temperatura é um parâmetro importante na cultura de células porque afeta a reprodutibilidade dos resultados. As mudanças de temperatura acima ou abaixo de 37 ° C têm um efeito muito significativo na cinética de crescimento celular das células de mamíferos, semelhante à das células bacterianas. Changes in gene expression and modifications in cellular structure, cell cycle progression, mRNA stability can be detected in mammalian cells after one hour at 32ºC. In addition to directly affecting cell growth, changes in temperature also affect the pH of the media, as the solubility of CO2 alters the pH (pH increases at lower temperatures). As células de mamíferos cultivadas podem tolerar a temperatura significativa. Eles podem ser armazenados a 4 ° C por vários dias e podem tolerar congelamento a -196 ° C (usando condições apropriadas). No entanto, eles não podem tolerar temperaturas acima de 2 ° C acima do normal por mais de algumas horas e morrem rapidamente a 40 ° C e acima. To ensure maximum reproducibility of results, even if the cells survive, care needs to be taken to maintain the temperature as constant as possible during the incubation and handling of the cells outside the incubator.
Razões para variações de temperatura dentro da incubadora
Você terá notado que, quando a porta da incubadora for aberta, a temperatura cai rapidamente para o valor definido de 37 ° C. Em geral, a temperatura se recuperará alguns minutos depois que a porta é fechada. De fato, as culturas estáticas precisam de tempo para se recuperar para a temperatura definida na incubadora. Vários fatores podem afetar o tempo necessário para uma cultura de células recuperar a temperatura após o tratamento fora da incubadora.Esses fatores incluem:
- ▶ O período de tempo em que as células foram fora da incubadora
- ▶ O tipo de balão no qual as células são cultivadas (a geometria afeta a transferência de calor)
- ▶ Número de recipientes na incubadora.
- ▶ diretamente na prateleira da incubadora.
A temperatura inicial de quaisquer recipientes novos e meios utilizados também afetará o tempo necessário para que as células estejam em seu estado ideal; Quanto menor a temperatura, mais tempo leva.
Se todos esses fatores mudarem ao longo do tempo, eles também aumentarão a variabilidade entre os experimentos. It is necessary to minimize these temperature fluctuations, even if it is not always possible to control everything (especially if several people are using the same incubator).
Como minimizar as variações de temperatura e reduzir o tempo de recuperação da temperatura
Ao pré -aquecer o meio
Alguns pesquisadores estão acostumados a pré-aquecer garrafas inteiras de mídia em um banho de água de 37 ° C para levá-los a essa temperatura antes do uso. It is also possible to preheat the medium in an incubator that is only used for medium preheating and not for cell culture, where the medium can reach an optimal temperature without disturbing the cell cultures in another incubator. Mas isso, até onde sabemos, geralmente não é uma despesa acessível.
Dentro da incubadora
Abra a porta da incubadora o mínimo possível e feche -a o mais rápido possível. Evite pontos frios, que criam diferenças de temperatura na incubadora. Deixe o espaço entre os frascos para permitir que o ar circule. As prateleiras dentro da incubadora podem ser perfuradas. Isso permite uma melhor distribuição de calor, pois permite que o ar passe pelos orifícios. However, the presence of holes can lead to differences in cell growth, because there is a temperature difference between the area with holes and the area with meta. For these reasons, if your experiments require highly uniform growth of the cell culture, you can place the culture flasks on metal supports with smaller contact surfaces, which are usually not necessary in routine cell culture.
Minimizando o tempo de processamento de células
Para minimizar o tempo gasto no processo de tratamento celular, você precisa
- ▶ Organize todos os materiais e ferramentas necessários antes de começar a trabalhar.
- ▶ Trabalhe de maneira rápida e suave, revisando os métodos experimentais com antecedência para que suas operações se tornem repetitivas e automatizadas.
- ▶ Minimize o contato de líquidos com ar ambiente.
- ▶ Mantenha uma temperatura constante no laboratório de cultura de células onde você trabalha.
Hora de postagem: agosto de 18-2023