Efeito da variação de temperatura na cultura celular
A temperatura é um parâmetro importante na cultura de células porque afeta a reprodutibilidade dos resultados. Alterações de temperatura acima ou abaixo de 37 °C têm um efeito muito significativo na cinética de crescimento celular de células de mamíferos, semelhante à das células bacterianas. Alterações na expressão gênica e modificações na estrutura celular, progressão do ciclo celular e estabilidade do mRNA podem ser detectadas em células de mamíferos após uma hora a 32 °C. Além de afetar diretamente o crescimento celular, as alterações na temperatura também afetam o pH do meio, pois a solubilidade do CO2 altera o pH (o pH aumenta em temperaturas mais baixas). Células de mamíferos cultivadas podem tolerar reduções significativas de temperatura. Elas podem ser armazenadas a 4 °C por vários dias e podem tolerar congelamento a -196 °C (usando condições apropriadas). No entanto, elas não toleram temperaturas acima de cerca de 2 °C acima do normal por mais de algumas horas e morrerão rapidamente a 40 °C e acima. Para garantir a máxima reprodutibilidade dos resultados, mesmo que as células sobrevivam, é preciso tomar cuidado para manter a temperatura o mais constante possível durante a incubação e o manuseio das células fora da incubadora.
Razões para variações de temperatura dentro da incubadora
Você deve ter notado que, quando a porta da incubadora é aberta, a temperatura cai rapidamente para o valor definido de 37 °C. Em geral, a temperatura se recupera em poucos minutos após o fechamento da porta. De fato, culturas estáticas precisam de tempo para retornar à temperatura definida na incubadora. Diversos fatores podem afetar o tempo que uma cultura celular leva para recuperar a temperatura após o tratamento fora da incubadora.Esses fatores incluem:
- ▶o tempo que as células ficaram fora da incubadora
- ▶o tipo de frasco no qual as células são cultivadas (a geometria afeta a transferência de calor)
- ▶Número de recipientes na incubadora.
- ▶O contato direto dos frascos com a prateleira de aço afeta a troca de calor e a velocidade de obtenção da temperatura ideal, por isso é melhor evitar pilhas de frascos e colocar cada recipiente
- ▶diretamente na prateleira da incubadora.
A temperatura inicial de quaisquer recipientes e meios novos usados também afetará o tempo que as células levam para atingir seu estado ideal; quanto menor a temperatura, mais tempo levará.
Se todos esses fatores mudarem ao longo do tempo, eles também aumentarão a variabilidade entre os experimentos. É necessário minimizar essas flutuações de temperatura, mesmo que nem sempre seja possível controlar tudo (especialmente se várias pessoas estiverem usando a mesma incubadora).
Como minimizar as variações de temperatura e reduzir o tempo de recuperação da temperatura
Pré-aquecendo o meio
Alguns pesquisadores estão acostumados a pré-aquecer frascos inteiros de meio em banho-maria a 37 °C para atingir essa temperatura antes do uso. Também é possível pré-aquecer o meio em uma incubadora usada apenas para pré-aquecimento de meio e não para cultura de células, onde o meio pode atingir uma temperatura ideal sem perturbar as culturas de células em outra incubadora. Mas isso, até onde sabemos, geralmente não é um custo acessível.
Dentro da Incubadora
Abra a porta da incubadora o mínimo possível e feche-a o mais rápido possível. Evite pontos frios, que criam diferenças de temperatura na incubadora. Deixe espaço entre os frascos para permitir a circulação de ar. As prateleiras dentro da incubadora podem ser perfuradas. Isso permite uma melhor distribuição de calor, pois permite a passagem de ar pelos orifícios. No entanto, a presença de orifícios pode levar a diferenças no crescimento celular, pois há uma diferença de temperatura entre a área com orifícios e a área com metacrilato. Por essas razões, se seus experimentos exigirem um crescimento altamente uniforme da cultura celular, você pode colocar os frascos de cultura em suportes metálicos com superfícies de contato menores, o que geralmente não é necessário na cultura celular de rotina.
Minimizando o tempo de processamento da célula
Para minimizar o tempo gasto no processo de tratamento celular, você precisa
- ▶Organize todos os materiais e ferramentas necessários antes de começar a trabalhar.
- ▶Trabalhe de forma rápida e tranquila, revisando métodos experimentais com antecedência para que suas operações se tornem repetitivas e automatizadas.
- ▶Minimize o contato de líquidos com o ar ambiente.
- ▶Mantenha uma temperatura constante no laboratório de cultura de células onde você trabalha.
Data de publicação: 18/08/2023