Sıcaklık değişiminin hücre kültürü üzerindeki etkisi
Sıcaklık, hücre kültüründe önemli bir parametredir çünkü sonuçların tekrarlanabilirliğini etkiler. 37°C'nin üstünde veya altında sıcaklık değişimleri, bakteri hücrelerine benzer şekilde memeli hücrelerinin hücre büyüme kinetiği üzerinde çok önemli bir etkiye sahiptir. Gen ifadesindeki değişiklikler ve hücresel yapıdaki, hücre döngüsü ilerlemesindeki, mRNA stabilitesindeki modifikasyonlar, 32ºC'de bir saat sonra memeli hücrelerinde tespit edilebilir. Sıcaklıktaki değişiklikler, hücre büyümesini doğrudan etkilemenin yanı sıra, CO2'nin çözünürlüğü pH'ı değiştirdiğinden (pH daha düşük sıcaklıklarda artar) ortamın pH'ını da etkiler. Kültürlenmiş memeli hücreleri, önemli sıcaklık düşüşlerine dayanabilir. 4 °C'de birkaç gün saklanabilir ve -196 °C'ye kadar dondurulabilir (uygun koşullar kullanıldığında). Ancak, normalin yaklaşık 2 °C üzerindeki sıcaklıklara birkaç saatten fazla dayanamazlar ve 40 °C ve üzerinde hızla ölürler. Hücreler hayatta kalsa bile sonuçların maksimum tekrarlanabilirliğini sağlamak için, hücrelerin inkübasyonu ve inkübatör dışında tutulması sırasında sıcaklığın mümkün olduğunca sabit tutulmasına dikkat edilmelidir.
Kuluçka makinesinin içindeki sıcaklık değişimlerinin nedenleri
İnkübatör kapağı açıldığında sıcaklığın hızla 37 °C'lik ayar değerine düştüğünü fark etmişsinizdir. Genellikle, kapak kapatıldıktan sonra sıcaklık birkaç dakika içinde eski haline döner. Aslında, statik kültürlerin inkübatörde ayarlanan sıcaklığa ulaşması için zamana ihtiyacı vardır. Bir hücre kültürünün inkübatör dışında işlemden sonra sıcaklığı yeniden kazanması için gereken süreyi etkileyen bir dizi faktör olabilir.Bu faktörler şunlardır:
- ▶hücrelerin inkübatör dışında kaldığı süre
- ▶hücrelerin büyütüldüğü şişenin türü (geometri ısı transferini etkiler)
- ▶İnkübatördeki kap sayısı.
- ▶Flakonların çelik rafla doğrudan teması ısı değişimini ve optimum sıcaklığa ulaşma hızını etkiler, bu nedenle flakonların üst üste konulmasından kaçınılmalı ve her bir kap aynı hizada olacak şekilde yerleştirilmelidir.
- ▶doğrudan kuluçka makinesinin rafında.
Kullanılan herhangi bir taze kap ve ortamın başlangıç sıcaklığı, hücrelerin optimum duruma gelmesi için gereken süreyi de etkileyecektir; sıcaklık ne kadar düşükse, o kadar uzun sürer.
Tüm bu faktörler zamanla değişirse, deneyler arasındaki değişkenliği de artıracaktır. Her şeyi kontrol etmek her zaman mümkün olmasa bile (özellikle birkaç kişi aynı inkübatörü kullanıyorsa), bu sıcaklık dalgalanmalarını en aza indirmek gerekir.
Sıcaklık değişimlerini nasıl en aza indirebilir ve sıcaklık toparlanma süresini nasıl kısaltabilirsiniz?
Ortamı önceden ısıtarak
Bazı araştırmacılar, kullanmadan önce bu sıcaklığa getirmek için bütün şişelerdeki medyayı 37 °C'lik bir su banyosunda önceden ısıtmaya alışkındır. Ayrıca, yalnızca medya ön ısıtması için kullanılan ve hücre kültürü için kullanılmayan bir inkübatörde medyayı önceden ısıtmak da mümkündür; burada medya, başka bir inkübatördeki hücre kültürlerini bozmadan optimum bir sıcaklığa ulaşabilir. Ancak bildiğimiz kadarıyla bu genellikle karşılanabilir bir masraf değildir.
Kuluçka Makinesinin İçinde
Kuluçka makinesinin kapağını mümkün olduğunca az açın ve mümkün olduğunca çabuk kapatın. Kuluçka makinesinde sıcaklık farkları yaratan soğuk noktalardan kaçının. Havanın dolaşmasına izin vermek için şişeler arasında boşluk bırakın. Kuluçka makinesinin içindeki raflar delikli olabilir. Bu, deliklerden havanın geçmesine izin verdiği için daha iyi ısı dağılımı sağlar. Ancak deliklerin varlığı hücre büyümesinde farklılıklara yol açabilir, çünkü delikli alan ile meta'lı alan arasında bir sıcaklık farkı vardır. Bu nedenlerden dolayı, deneyleriniz hücre kültürünün oldukça düzgün büyümesini gerektiriyorsa, kültür şişelerini rutin hücre kültüründe genellikle gerekli olmayan daha küçük temas yüzeylerine sahip metal desteklere yerleştirebilirsiniz.
Hücre İşleme Süresini En Aza İndirme
Hücre tedavi sürecinde harcanan süreyi en aza indirmek için,
- ▶Çalışmaya başlamadan önce gerekli tüm malzeme ve araçları hazırlayın.
- ▶Operasyonlarınızın tekrarlanabilir ve otomatik hale gelmesi için deneysel yöntemleri önceden inceleyerek hızlı ve sorunsuz çalışın.
- ▶Sıvıların ortam havasıyla temasını en aza indirin.
- ▶Çalıştığınız hücre kültürü laboratuvarında sabit bir sıcaklık sağlayın.
Gönderi zamanı: 18-Ağu-2023