Paano pumili ng tamang amplitude para sa isang shaking incubator?
Ano ang amplitude ng isang shaker?
Ang amplitude ng isangpang-alog ng incubatoray ang diyametro ng pallet sa pabilog na galaw, minsan ay tinatawag na simbolo ng "oscillation diameter" o "track diameter": Ø. Nag-aalok ang Radobio ng mga karaniwang shaker na may mga amplitude na 3mm, 25mm, 26mm at 50mm. Mayroon ding mga customized na shaker na may iba't ibang laki ng amplitude.
Ano ang Oxygen Transfer Rate (OTR)?
Ang Oxygen Transfer Rate (OTR) ay ang kahusayan ng paglipat ng oxygen mula sa atmospera patungo sa likido. Kung mas mataas ang halaga ng OTR, mas mataas ang kahusayan ng paglipat ng oxygen.
Epekto ng Amplitude at Bilis ng Pag-ikot
Ang parehong salik na ito ay nakakaapekto sa paghahalo ng medium sa culture flask. Kung mas mahusay ang paghahalo, mas mahusay ang oxygen transfer rate (OTR). Kasunod ng mga patnubay na ito, maaaring mapili ang pinakaangkop na amplitude at bilis ng pag-ikot.
Sa pangkalahatan, ang pagpili ng 25mm o 26mm na amplitude ay maaaring gamitin bilang isang universal amplitude para sa lahat ng aplikasyon sa culture.
Mga kulturang bacterial, yeast at fungal:
Ang paglipat ng oksiheno sa mga shake flasks ay hindi gaanong mahusay kaysa sa mga bioreactor. Ang paglipat ng oksiheno ay maaaring ang naglilimitang salik para sa mga kultura ng shake flasks sa karamihan ng mga kaso. Ang amplitude ay nauugnay sa laki ng mga conical flasks: ang mas malalaking flasks ay gumagamit ng mas malalaking amplitude.
Rekomendasyon: 25mm amplitude para sa mga conical flasks mula 25ml hanggang 2000ml.
50 mm amplitude para sa mga conical flasks mula 2000 ml hanggang 5000 ml.
Kultura ng Selula:
* Ang kultura ng selula ng mamalya ay may medyo mababang pangangailangan sa oxygen.
* Para sa 250mL na shaker flasks, maaaring maibigay ang sapat na paghahatid ng oxygen sa medyo malawak na hanay ng amplitude at bilis (20-50mm amplitude; 100-300rpm).
* Para sa mga prasko na may mas malalaking diyametro (mga prasko ng Fernbach), inirerekomenda ang amplitude na 50mm.
* Kung gagamit ng mga disposable culture bag, inirerekomenda ang 50mm amplitude.
Mga platong microtiter at deep-well:
Para sa mga microtiter at deep-well plate, mayroong dalawang magkaibang paraan upang makuha ang pinakamataas na oxygen transfer!
* 50 mm amplitude sa bilis na hindi bababa sa 250 rpm.
* Gumamit ng 3mm amplitude sa 800-1000rpm.
Sa maraming pagkakataon, kahit na pumili ng makatwirang amplitude, maaaring hindi nito mapataas ang volume ng bioculture, dahil ang pagtaas ng volume ay maaaring maimpluwensyahan ng ilang salik. Halimbawa, kung ang isa o dalawa sa sampung salik ay hindi ideal, ang pagtaas ng volume ng culture ay magiging limitado gaano man kaganda ang iba pang mga salik, o maaaring ipagtalo na ang tamang pagpili ng amplitude ay magreresulta sa kapansin-pansing pagtaas sa incubator kung ang tanging limiting factor para sa volume ng culture ay ang oxygen delivery. Halimbawa, kung ang carbon source ang limiting factor, gaano man kaganda ang oxygen transfer, hindi makakamit ang ninanais na culture volume.
Amplitude at Bilis ng Pag-ikot
Ang amplitude at bilis ng pag-ikot ay maaaring magkaroon ng epekto sa paglipat ng oxygen. Kung ang mga cell culture ay pinalaki sa napakababang bilis ng pag-ikot (hal., 100 rpm), ang mga pagkakaiba sa amplitude ay may kaunti o walang kapansin-pansing epekto sa paglipat ng oxygen. Upang makamit ang pinakamataas na paglipat ng oxygen, ang unang hakbang ay dagdagan ang bilis ng pag-ikot hangga't maaari, at ang tray ay magiging maayos na balanse para sa bilis. Hindi lahat ng cell ay maaaring lumaki nang maayos sa mga high speed oscillations, at ang ilang mga cell na sensitibo sa shear forces ay maaaring mamatay mula sa mataas na bilis ng pag-ikot.
Iba pang mga impluwensya
Ang iba pang mga salik ay maaaring makaapekto sa paglipat ng oxygen:.
* Sa dami ng pagpuno, ang mga conical flask ay dapat mapuno nang hindi hihigit sa isang-katlo ng kabuuang volume. Kung nais makamit ang pinakamataas na paglipat ng oxygen, punuin nang hindi hihigit sa 10%. Huwag kailanman mapuno nang hanggang 50%.
* Mga Spoiler: Mabisa ang mga spoiler sa pagpapabuti ng paglipat ng oxygen sa lahat ng uri ng kultura. Inirerekomenda ng ilang tagagawa ang paggamit ng mga prasko na "Ultra High Yield". Pinapataas ng mga spoiler sa mga praskong ito ang friction ng likido at maaaring hindi maabot ng shaker ang pinakamataas na itinakdang bilis.
Ugnayan sa pagitan ng amplitude at bilis
Ang puwersang sentripugal sa isang shaker ay maaaring kalkulahin gamit ang sumusunod na equation
FC = rpm2× amplitude
Mayroong linear na ugnayan sa pagitan ng puwersang centrifugal at amplitude: kung gagamit ka ng 25 mm amplitude hanggang 50 mm amplitude (sa parehong bilis), ang puwersang centrifugal ay tataas nang 2 beses.
Mayroong parisukat na ugnayang umiiral sa pagitan ng puwersang sentripugal at bilis ng pag-ikot.
Kung ang bilis ay tataas nang 2 beses (parehong amplitude), ang puwersang sentripugal ay tataas nang 4 na beses. Kung ang bilis ay tataas nang 3 beses, ang puwersang sentripugal ay tataas nang 9 beses!
Kung gagamit ka ng amplitude na 25 mm, i-incubate sa isang takdang bilis. Kung nais mong makamit ang parehong centrifugal force na may amplitude na 50 mm, ang rotational speed ay dapat kalkulahin bilang square root ng 1/2, kaya dapat mong gamitin ang 70% ng rotational speed upang makamit ang parehong mga kondisyon ng incubation.
Pakitandaan na ang nasa itaas ay isa lamang teoretikal na pamamaraan ng pagkalkula ng puwersang sentripugal. May iba pang mga salik na nakakaimpluwensya sa mga totoong aplikasyon. Ang pamamaraang ito ng pagkalkula ay nagbibigay ng tinatayang mga halaga para sa mga layuning pang-operasyon.
Oras ng pag-post: Enero-03-2024