Уплыў змены тэмпературы на культуру клетак
Тэмпература з'яўляецца важным параметрам у культуры клетак, паколькі яна ўплывае на ўзнаўляльнасць вынікаў. Змены тэмпературы вышэй або ніжэй за 37°C аказваюць вельмі значны ўплыў на кінетыку росту клетак млекакормячых, падобна да кінетыкі росту бактэрыяльных клетак. Змены ў экспрэсіі генаў і мадыфікацыі ў клетачнай структуры, прагрэсіі клеткавага цыклу, стабільнасці мРНК можна выявіць у клетках млекакормячых праз адну гадзіну пры 32ºC. Акрамя непасрэднага ўплыву на рост клетак, змены тэмпературы таксама ўплываюць на pH асяроддзя, паколькі растваральнасць CO2 змяняе pH (pH павялічваецца пры больш нізкіх тэмпературах). Культураваныя клеткі млекакормячых могуць пераносіць значнае паніжэнне тэмпературы. Іх можна захоўваць пры 4°C на працягу некалькіх дзён і могуць пераносіць замарожванне да -196°C (пры ўмове адпаведных умоў). Аднак яны не могуць пераносіць тэмпературу вышэй за норму прыкладна на 2°C больш за некалькі гадзін і хутка гінуць пры 40°C і вышэй. Каб забяспечыць максімальную ўзнаўляльнасць вынікаў, нават калі клеткі выжывуць, неабходна сачыць за тым, каб тэмпература была максімальна пастаяннай падчас інкубацыі і апрацоўкі клетак па-за інкубатарам.
Прычыны перападаў тэмпературы ўнутры інкубатара
Вы, напэўна, заўважылі, што пры адчыненні дзверцаў інкубатара тэмпература хутка падае да зададзенага значэння 37 °C. Як правіла, тэмпература аднаўляецца праз некалькі хвілін пасля закрыцця дзверцаў. Фактычна, статычным культурам патрэбен час, каб аднавіцца да зададзенай тэмпературы ў інкубатары. На час, неабходны культуры клетак для аднаўлення тэмпературы пасля апрацоўкі па-за інкубатарам, можа паўплываць шэраг фактараў. Да гэтых фактараў адносяцца:
- ▶працягласць часу, на працягу якога клеткі знаходзіліся па-за інкубатарам
- ▶тып колбы, у якой вырошчваюцца клеткі (геаметрыя ўплывае на цеплаперадачу)
- ▶Колькасць кантэйнераў у інкубатары.
- ▶Непасрэдны кантакт колбаў са сталёвай паліцай уплывае на цеплаабмен і хуткасць дасягнення аптымальнай тэмпературы, таму лепш пазбягаць штабеляў колбаў і размяшчаць кожную ёмістасць
- ▶непасрэдна на паліцы інкубатара.
Пачатковая тэмпература любых свежых кантэйнераў і асяроддзяў, якія выкарыстоўваюцца, таксама паўплывае на час, неабходны для дасягнення клеткамі аптымальнага стану; чым ніжэйшая іх тэмпература, тым больш часу патрабуецца.
Калі ўсе гэтыя фактары з цягам часу зменяцца, яны таксама павялічаць зменлівасць паміж эксперыментамі. Неабходна мінімізаваць гэтыя ваганні тэмпературы, нават калі не заўсёды магчыма кантраляваць усё (асабліва калі некалькі чалавек выкарыстоўваюць адзін і той жа інкубатар).
Як мінімізаваць ваганні тэмпературы і скараціць час аднаўлення тэмпературы
Пры папярэднім награванні асяроддзя
Некаторыя даследчыкі прызвычаіліся да папярэдняга нагрэву цэлых бутэльк з асяроддзем у вадзяной лазні пры тэмпературы 37 °C, каб давесці іх да гэтай тэмпературы перад выкарыстаннем. Таксама можна папярэдне нагрэць асяроддзе ў інкубатары, які выкарыстоўваецца толькі для папярэдняга нагрэву асяроддзя, а не для культывавання клетак, дзе асяроддзе можа дасягнуць аптымальнай тэмпературы, не парушаючы клетачныя культуры ў іншым інкубатары. Але, наколькі нам вядома, гэта звычайна недаступныя выдаткі.
Унутры інкубатара
Адчыняйце дзверцы інкубатара як мага радзей і зачыняйце іх як мага хутчэй. Пазбягайце халодных месцаў, якія ствараюць перапады тэмператур у інкубатары. Пакідайце прастору паміж колбамі для цыркуляцыі паветра. Паліцы ўнутры інкубатара могуць быць перфараванымі. Гэта дазваляе лепш размеркаваць цяпло, бо дазваляе паветру праходзіць праз адтуліны. Аднак наяўнасць адтулін можа прывесці да адрозненняў у росце клетак, таму што існуе розніца тэмператур паміж зонай з адтулінамі і зонай з мета. Па гэтых прычынах, калі вашы эксперыменты патрабуюць вельмі раўнамернага росту культуры клетак, вы можаце размясціць культуральныя колбы на металічных падстаўках з меншымі паверхнямі кантакту, якія звычайна не патрэбныя ў звычайных культурах клетак.
Мінімізацыя часу апрацоўкі клетак
Каб мінімізаваць час, які затрачваецца на працэс апрацоўкі клетак, неабходна
- ▶ Перад пачаткам працы падрыхтуйце ўсе неабходныя матэрыялы і інструменты.
- ▶Працуйце хутка і плаўна, загадзя праглядаючы эксперыментальныя метады, каб вашы аперацыі сталі паўтаральнымі і аўтаматызаванымі.
- ▶Мінімізуйце кантакт вадкасцей з навакольным паветрам.
- ▶ Падтрымлівайце пастаянную тэмпературу ў лабараторыі клетачных культур, дзе вы працуеце.
Час публікацыі: 03 студзеня 2024 г.