中文
Уплыў змены тэмпературы на клеткавую культуру
Тэмпература з'яўляецца важным параметрам у клеткавай культуры, паколькі яна ўплывае на ўзнаўляльнасць вынікаў. Змены тэмпературы вышэй або ніжэй за 37 ° С аказваюць вельмі значны ўплыў на кінетыку росту клетак клетак млекакормячых, падобную на бактэрыяльныя клеткі. Змены ў экспрэсіі і мадыфікацыі генаў у клеткавай структуры, прагрэсаванне клеткавага цыклу, устойлівасць мРНК можна выявіць у клетках млекакормячых праз гадзіну пры 32 ° С. У дадатак да непасрэднага ўплыву росту клетак, змены тэмпературы таксама ўплываюць на рН асяроддзя, паколькі растваральнасць CO2 змяняе рН (рН павялічваецца пры больш нізкіх тэмпературах). Культурныя клеткі млекакормячых могуць пераносіць значнае зніжэнне тэмпературы. Яны могуць захоўвацца пры 4 ° С на працягу некалькіх дзён і могуць пераносіць замярзанне да -196 ° С (з выкарыстаннем адпаведных умоў). Аднак яны не могуць пераносіць тэмпературу вышэй за 2 ° С вышэй за норму больш за некалькі гадзін і хутка загінуць пры 40 ° С і вышэй. Каб забяспечыць максімальную ўзнаўляльнасць вынікаў, нават калі клеткі выжываюць, неабходна сачыць за падтрыманнем тэмпературы як мага больш пастаяннай падчас інкубацыі і апрацоўкі клетак па -за інкубатара.
Прычыны ваганняў тэмпературы ўнутры інкубатара
Вы заўважылі, што пры адчыненай дзверы інкубатара тэмпература хутка падае да ўстаноўленага значэння 37 ° С. Увогуле, тэмпература аднаўляецца на працягу некалькіх хвілін пасля закрыцця дзвярэй. На самай справе, статычным культурам патрэбны час, каб аднавіцца да ўстаноўленай тэмпературы ў інкубатары. Шэраг фактараў можа паўплываць на час, неабходнае для клеткавай культуры, каб аднавіць тэмпературу пасля лячэння за межамі інкубатара. Гэтыя фактары ўключаюць:
- ▶ Прамежак часу, калі клеткі былі з -за інкубатара
- ▶ Тып колбы, у якой вырошчваюцца клеткі (геаметрыя ўплывае на перадачу цяпла)
- ▶ Колькасць кантэйнераў у інкубатары.
- ▶ Непасрэдны кантакт з колбамі са сталёвай палічкай уплывае на цеплаабмену і хуткасць дасягнення аптымальнай тэмпературы, таму лепш пазбегнуць стэкаў колбаў і размяшчэння кожнага посуду
- ▶ непасрэдна на паліцы інкубатара.
Першапачатковая тэмпература любых свежых кантэйнераў і выкарыстаных асяроддзяў таксама паўплывае на час, каб клеткі былі ў іх аптымальным стане; Чым ніжэй іх тэмпература, тым даўжэй займае.
Калі ўсе гэтыя фактары мяняюцца з цягам часу, яны таксама павялічаць зменлівасць паміж эксперыментамі. Неабходна мінімізаваць гэтыя ваганні тэмпературы, нават калі не заўсёды можна кантраляваць усё (асабліва, калі некалькі чалавек выкарыстоўваюць адзін і той жа інкубатар).
Як мінімізаваць змены тэмператур і скараціць час аднаўлення тэмпературы
Папярэдне разагрэў асяроддзе
Некаторыя даследчыкі прывыклі да папярэдняга сагравання цэлых бутэлек з асяроддзя на вадзяной лазні на 37 ° С, каб давесці іх да гэтай тэмпературы перад выкарыстаннем. Таксама можна разагрэць асяроддзе ў інкубатары, якая выкарыстоўваецца толькі для сярэдняга разагрэву, а не для клеткавай культуры, дзе асяроддзе можа дасягнуць аптымальнай тэмпературы, не парушаючы клеткавых культур у іншай інкубатары. Але, наколькі мы ведаем, гэта звычайна не з'яўляецца даступным выдаткам.
Унутры інкубатара
Адкрыйце дзверы інкубатара як мага хутчэй і зачыніце яе як хутка. Пазбягайце халодных плям, якія ствараюць тэмпературныя адрозненні ў інкубатары. Пакіньце прастору паміж колбамі, каб дазволіць паветра цыркуляваць. Паліцы ўнутры інкубатара могуць быць перфараваны. Гэта дазваляе лепшае размеркаванне цяпла, бо дазваляе паветра праходзіць праз адтуліны. Аднак наяўнасць адтулін можа прывесці да адрозненняў у росце клетак, паколькі існуе розніца ў тэмпературы паміж вобласцю з адтулінамі і плошчай з мета. Па гэтых прычынах, калі вашы эксперыменты патрабуюць высока раўнамернага росту клеткавай культуры, вы можаце размясціць колбы культуры на металічных апорах з меншымі кантактнымі паверхнямі, якія звычайна не патрэбныя ў звычайнай культуры клетак.
Мінімізацыя часу апрацоўкі клетак
Каб звесці да мінімуму час выдаткаў на працэс лячэння клетак, вам трэба
- ▶ Арганізуйце ўсе неабходныя матэрыялы і інструменты, перш чым пачаць працаваць.
- ▶ Працуйце хутка і гладка, загадзя разглядаючы эксперыментальныя метады, каб вашы аперацыі паўтараліся і аўтаматызаваліся.
- ▶ Звядзіце да мінімуму кантакт вадкасцяў з навакольным паветрам.
- ▶ Падтрымлівайце пастаянную тэмпературу ў лабараторыі клеткавай культуры, дзе вы працуеце.
Час паведамлення: студзень 03-2024