Pengaruh variasi suhu terhadap kultur sel dalam inkubator CO2
Suhu merupakan parameter penting dalam kultur sel karena memengaruhi reproduksibilitas hasil. Perubahan suhu di atas atau di bawah 37°C memiliki efek yang sangat signifikan pada kinetika pertumbuhan sel mamalia, mirip dengan sel bakteri. Perubahan ekspresi gen dan modifikasi struktur sel, perkembangan siklus sel, stabilitas mRNA dapat dideteksi pada sel mamalia setelah satu jam pada suhu 32ºC. Selain secara langsung memengaruhi pertumbuhan sel, perubahan suhu juga memengaruhi pH media, karena kelarutan CO2 mengubah pH (pH meningkat pada suhu yang lebih rendah). Sel mamalia yang dikultur dapat mentolerir penurunan suhu yang signifikan. Sel tersebut dapat disimpan pada suhu 4 °C selama beberapa hari dan dapat mentolerir pembekuan hingga -196 °C (dengan menggunakan kondisi yang sesuai). Namun, sel tersebut tidak dapat mentolerir suhu di atas sekitar 2 °C di atas suhu normal selama lebih dari beberapa jam dan akan mati dengan cepat pada suhu 40 °C ke atas. Untuk memastikan reproduksibilitas hasil yang maksimal, bahkan jika sel-sel tersebut bertahan hidup, perlu diperhatikan untuk menjaga suhu sekonstan mungkin selama inkubasi dan penanganan sel di luar inkubator.
Penyebab variasi suhu di dalam inkubator
Anda mungkin memperhatikan bahwa ketika pintu inkubator dibuka, suhu turun dengan cepat ke nilai yang ditetapkan yaitu 37 °C. Secara umum, suhu akan pulih dalam beberapa menit setelah pintu ditutup. Faktanya, kultur statis membutuhkan waktu untuk pulih ke suhu yang ditetapkan di dalam inkubator. Sejumlah faktor dapat memengaruhi waktu yang dibutuhkan kultur sel untuk mendapatkan kembali suhu setelah perlakuan di luar inkubator. Faktor-faktor ini meliputi:
- ▶lamanya waktu sel berada di luar inkubator
- ▶jenis labu tempat sel ditumbuhkan (geometri memengaruhi perpindahan panas)
- ▶Jumlah wadah dalam inkubator.
- ▶Kontak langsung antara labu dengan rak baja memengaruhi pertukaran panas dan kecepatan mencapai suhu optimal, jadi sebaiknya hindari menumpuk labu dan letakkan setiap wadah secara terpisah.
- ▶langsung di rak inkubator.
Suhu awal dari wadah dan media baru yang digunakan juga akan memengaruhi waktu yang dibutuhkan sel untuk mencapai kondisi optimalnya; semakin rendah suhunya, semakin lama waktu yang dibutuhkan.
Jika semua faktor ini berubah seiring waktu, maka variabilitas antar eksperimen juga akan meningkat. Penting untuk meminimalkan fluktuasi suhu ini, meskipun tidak selalu mungkin untuk mengontrol semuanya (terutama jika beberapa orang menggunakan alat yang sama).inkubator CO2).
Cara meminimalkan variasi suhu dan mengurangi waktu pemulihan suhu.
Dengan memanaskan media terlebih dahulu
Beberapa peneliti terbiasa memanaskan seluruh botol media terlebih dahulu dalam penangas air 37 °C untuk mencapai suhu tersebut sebelum digunakan. Dimungkinkan juga untuk memanaskan media terlebih dahulu dalam inkubator yang hanya digunakan untuk pemanasan media dan bukan untuk kultur sel, di mana media dapat mencapai suhu optimal tanpa mengganggu kultur sel di inkubator lain. Namun, sejauh yang kami ketahui, hal ini biasanya bukan pengeluaran yang terjangkau.
Di Dalam Inkubator
Buka pintu inkubator sesedikit mungkin dan tutup secepat mungkin. Hindari titik dingin yang menciptakan perbedaan suhu di dalam inkubator. Sisakan ruang di antara labu agar udara dapat bersirkulasi. Rak di dalam inkubator dapat dilubangi. Ini memungkinkan distribusi panas yang lebih baik karena memungkinkan udara melewati lubang-lubang tersebut. Namun, keberadaan lubang dapat menyebabkan perbedaan pertumbuhan sel, karena ada perbedaan suhu antara area berlubang dan area tanpa lubang. Karena alasan ini, jika eksperimen Anda membutuhkan pertumbuhan kultur sel yang sangat seragam, Anda dapat menempatkan labu kultur pada penyangga logam dengan permukaan kontak yang lebih kecil, yang biasanya tidak diperlukan dalam kultur sel rutin.
Meminimalkan Waktu Pemrosesan Sel
Untuk meminimalkan waktu yang dihabiskan dalam proses perawatan sel, Anda perlu
- ▶Siapkan semua bahan dan peralatan yang diperlukan sebelum Anda mulai bekerja.
- ▶Bekerja dengan cepat dan lancar, meninjau metode eksperimental terlebih dahulu sehingga operasi Anda menjadi berulang dan otomatis.
- ▶Minimalkan kontak cairan dengan udara sekitar.
- ▶Jaga agar suhu di laboratorium kultur sel tempat Anda bekerja tetap konstan.
Waktu posting: 03-Jan-2024