CO2 inkubatorunda temperatur dəyişikliyinin hüceyrə kulturasına təsiri
Temperatur hüceyrə kulturasında vacib bir parametrdir, çünki nəticələrin təkrarlanmasına təsir göstərir. 37°C-dən yuxarı və ya aşağı temperatur dəyişiklikləri, bakteriya hüceyrələrindəki kimi, məməli hüceyrələrinin hüceyrə böyümə kinetikasına çox əhəmiyyətli təsir göstərir. Gen ifadəsindəki dəyişikliklər və hüceyrə quruluşundakı dəyişikliklər, hüceyrə dövrünün irəliləməsi, mRNT sabitliyi məməli hüceyrələrində 32ºC-də bir saatdan sonra aşkar edilə bilər. Hüceyrə böyüməsinə birbaşa təsir etməklə yanaşı, temperatur dəyişiklikləri mühitin pH-ına da təsir göstərir, çünki CO2-nin həllolma qabiliyyəti pH-ı dəyişir (pH aşağı temperaturda artır). Becərilən məməli hüceyrələri əhəmiyyətli dərəcədə temperatur düşməsinə dözə bilir. Onlar 4°C-də bir neçə gün saxlanıla bilər və (uyğun şərtlərdən istifadə etməklə) -196°C-yə qədər donmağa dözə bilirlər. Lakin, onlar normaldan təxminən 2°C-dən yuxarı temperaturlara bir neçə saatdan çox dözə bilmirlər və 40°C və daha yuxarı temperaturda tez ölürlər. Nəticələrin maksimum təkrarlanması üçün, hətta hüceyrələr sağ qalsa belə, inkubasiya və hüceyrələrin inkubator xaricində işlənməsi zamanı temperaturun mümkün qədər sabit qalmasına diqqət yetirilməlidir.
İnkubatorun içərisində temperatur fərqlərinin səbəbləri
İnkubator qapısı açıldıqda temperaturun 37 °C-yə qədər sürətlə düşdüyünü görmüş olacaqsınız. Ümumiyyətlə, qapı bağlandıqdan sonra temperatur bir neçə dəqiqə ərzində bərpa olunacaq. Əslində, statik kulturaların inkubatorda müəyyən edilmiş temperatura qayıtması üçün vaxt lazımdır. Bir sıra amillər inkubator xaricində müalicədən sonra hüceyrə kulturasının temperaturu bərpa etməsi üçün lazım olan vaxta təsir göstərə bilər. Bu amillərə aşağıdakılar daxildir:
- ▶hüceyrələrin inkubatordan çıxdığı müddət
- ▶ hüceyrələrin yetişdirildiyi kolba növü (həndəsə istilik ötürülməsinə təsir göstərir)
- ▶İnkubatordakı qabların sayı.
- ▶Kolbaların polad rəflə birbaşa təması istilik mübadiləsinə və optimal temperatura çatma sürətinə təsir göstərir, buna görə də kolba yığınlarından qaçınmaq və hər qabı bir-birinə uyğun yerləşdirmək daha yaxşıdır.
- ▶ birbaşa inkubatorun rəfində.
İstifadə olunan hər hansı təzə qabın və mühitin ilkin temperaturu da hüceyrələrin optimal vəziyyətə gəlməsi üçün lazım olan vaxta təsir edəcək; temperatur nə qədər aşağı olarsa, bir o qədər uzun müddət davam edəcək.
Əgər bütün bu amillər zamanla dəyişərsə, onlar təcrübələr arasındakı dəyişkənliyi də artıracaq. Hər şeyi idarə etmək həmişə mümkün olmasa belə (xüsusən də bir neçə nəfər eyni cihazdan istifadə edirsə), bu temperatur dalğalanmalarını minimuma endirmək lazımdır.CO2 inkubatoru).
Temperatur dəyişikliklərini necə minimuma endirmək və temperaturun bərpa müddətini necə azaltmaq olar
Orta mühiti əvvəlcədən qızdırmaqla
Bəzi tədqiqatçılar istifadə etməzdən əvvəl bu temperatura çatmaq üçün bütün butulkaları 37 °C su hamamında əvvəlcədən qızdırmağa vərdiş etmişlər. Həmçinin, mühiti yalnız mühitin əvvəlcədən qızdırılması üçün istifadə edilən və hüceyrə kulturası üçün istifadə edilməyən bir inkubatorda qızdırmaq da mümkündür, burada mühit başqa bir inkubatorda hüceyrə kulturalarını pozmadan optimal temperatura çata bilər. Lakin bildiyimiz qədəri ilə bu, adətən əlverişli bir xərc deyil.
İnkubatorun içərisində
İnkubatorun qapısını mümkün qədər az açın və mümkün qədər tez bağlayın. İnkubatorda temperatur fərqləri yaradan soyuq nöqtələrdən çəkinin. Havanın dövran etməsi üçün kolbalar arasında boşluq saxlayın. İnkubatorun içərisindəki rəflər perforasiya edilə bilər. Bu, havanın dəliklərdən keçməsinə imkan verdiyi üçün daha yaxşı istilik paylanmasına imkan verir. Lakin, dəliklərin olması hüceyrə böyüməsində fərqlərə səbəb ola bilər, çünki dəlikləri olan sahə ilə meta olan sahə arasında temperatur fərqi var. Bu səbəblərə görə, təcrübələriniz hüceyrə kulturasının yüksək dərəcədə vahid böyüməsini tələb edirsə, kultura kolbalarını adətən adi hüceyrə kulturasında lazım olmayan daha kiçik təmas səthləri olan metal dayaqlara yerləşdirə bilərsiniz.
Hüceyrə emalı vaxtının minimuma endirilməsi
Hüceyrə müalicəsi prosesinə sərf olunan vaxtı minimuma endirmək üçün sizə lazımdır
- ▶İşə başlamazdan əvvəl bütün lazımi materialları və alətləri hazırlayın.
- ▶ Əməliyyatlarınızın təkrarlanması və avtomatlaşdırılması üçün eksperimental metodları əvvəlcədən nəzərdən keçirərək tez və problemsiz işləyin.
- ▶ Mayelərin ətraf mühit havası ilə təmasını minimuma endirin.
- ▶İşlədiyiniz hüceyrə kulturası laboratoriyasında sabit temperatur saxlayın.
Yazı vaxtı: 03 Yanvar 2024