Ảnh hưởng của sự thay đổi nhiệt độ đến nuôi cấy tế bào trong lồng ấp CO2.
Nhiệt độ là một thông số quan trọng trong nuôi cấy tế bào vì nó ảnh hưởng đến tính khả reproducible của kết quả. Sự thay đổi nhiệt độ trên hoặc dưới 37°C có ảnh hưởng rất đáng kể đến động học tăng trưởng của tế bào động vật có vú, tương tự như tế bào vi khuẩn. Sự thay đổi trong biểu hiện gen và các biến đổi trong cấu trúc tế bào, tiến trình chu kỳ tế bào, độ ổn định mRNA có thể được phát hiện ở tế bào động vật có vú sau một giờ ở 32ºC. Ngoài việc ảnh hưởng trực tiếp đến sự tăng trưởng của tế bào, sự thay đổi nhiệt độ cũng ảnh hưởng đến độ pH của môi trường nuôi cấy, vì độ hòa tan của CO2 làm thay đổi độ pH (pH tăng ở nhiệt độ thấp hơn). Tế bào động vật có vú được nuôi cấy có thể chịu được sự giảm nhiệt độ đáng kể. Chúng có thể được bảo quản ở 4°C trong vài ngày và có thể chịu được đông lạnh đến -96°C (sử dụng các điều kiện thích hợp). Tuy nhiên, chúng không thể chịu được nhiệt độ cao hơn khoảng 2°C so với bình thường trong hơn vài giờ và sẽ chết nhanh chóng ở 40°C trở lên. Để đảm bảo tính khả reproducible tối đa của kết quả, ngay cả khi tế bào sống sót, cần phải cẩn thận duy trì nhiệt độ càng ổn định càng tốt trong suốt quá trình ủ và xử lý tế bào bên ngoài tủ ấm.
Nguyên nhân gây ra sự biến đổi nhiệt độ bên trong lồng ấp
Bạn có thể nhận thấy rằng khi mở cửa tủ ấm, nhiệt độ giảm nhanh chóng xuống mức cài đặt là 37 °C. Nói chung, nhiệt độ sẽ phục hồi trong vòng vài phút sau khi đóng cửa. Trên thực tế, nuôi cấy tĩnh cần thời gian để phục hồi đến nhiệt độ cài đặt trong tủ ấm. Một số yếu tố có thể ảnh hưởng đến thời gian cần thiết để nuôi cấy tế bào phục hồi nhiệt độ sau khi xử lý bên ngoài tủ ấm. Các yếu tố này bao gồm:
- ▶ khoảng thời gian tế bào đã được lấy ra khỏi lồng ấp
- ▶ Loại bình nuôi cấy tế bào (hình dạng hình học ảnh hưởng đến sự truyền nhiệt)
- ▶Số lượng hộp chứa trong máy ấp trứng.
- ▶Việc các bình tiếp xúc trực tiếp với giá đỡ bằng thép ảnh hưởng đến quá trình trao đổi nhiệt và tốc độ đạt đến nhiệt độ tối ưu, vì vậy tốt hơn hết là nên tránh xếp chồng các bình lên nhau và đặt từng bình riêng biệt.
- ▶Đặt trực tiếp lên giá đỡ của máy ấp trứng.
Nhiệt độ ban đầu của bất kỳ vật chứa và môi trường nuôi cấy mới nào cũng sẽ ảnh hưởng đến thời gian cần thiết để tế bào đạt đến trạng thái tối ưu; nhiệt độ càng thấp, thời gian càng lâu.
Nếu tất cả các yếu tố này thay đổi theo thời gian, chúng cũng sẽ làm tăng sự khác biệt giữa các thí nghiệm. Cần phải giảm thiểu những biến động nhiệt độ này, ngay cả khi không phải lúc nào cũng có thể kiểm soát được mọi thứ (đặc biệt nếu nhiều người cùng sử dụng một thiết bị).Máy ấp trứng CO2).
Làm thế nào để giảm thiểu sự thay đổi nhiệt độ và rút ngắn thời gian phục hồi nhiệt độ?
Bằng cách làm nóng trước môi trường.
Một số nhà nghiên cứu thường làm ấm trước toàn bộ chai môi trường nuôi cấy trong bể nước ở nhiệt độ 37°C để đạt đến nhiệt độ này trước khi sử dụng. Cũng có thể làm nóng trước môi trường nuôi cấy trong tủ ấm chỉ dùng để làm nóng môi trường chứ không dùng để nuôi cấy tế bào, nơi môi trường có thể đạt đến nhiệt độ tối ưu mà không làm ảnh hưởng đến các tế bào đang được nuôi cấy trong tủ ấm khác. Tuy nhiên, theo như chúng tôi biết, phương pháp này thường không khả thi về mặt chi phí.
Bên trong lồng ấp
Mở cửa tủ ấm càng ít càng tốt và đóng lại càng nhanh càng tốt. Tránh các điểm lạnh, vì chúng tạo ra sự chênh lệch nhiệt độ trong tủ ấm. Để khoảng trống giữa các bình nuôi cấy để không khí có thể lưu thông. Các giá đỡ bên trong tủ ấm có thể được đục lỗ. Điều này cho phép phân bố nhiệt tốt hơn vì nó cho phép không khí đi qua các lỗ. Tuy nhiên, sự hiện diện của các lỗ có thể dẫn đến sự khác biệt trong sự phát triển của tế bào, vì có sự chênh lệch nhiệt độ giữa vùng có lỗ và vùng có kim loại. Vì những lý do này, nếu thí nghiệm của bạn yêu cầu sự phát triển đồng đều cao của nuôi cấy tế bào, bạn có thể đặt các bình nuôi cấy trên giá đỡ bằng kim loại có diện tích tiếp xúc nhỏ hơn, điều này thường không cần thiết trong nuôi cấy tế bào thông thường.
Giảm thiểu thời gian xử lý tế bào
Để giảm thiểu thời gian thực hiện quy trình xử lý tế bào, bạn cần phải...
- ▶Hãy chuẩn bị đầy đủ các vật liệu và dụng cụ cần thiết trước khi bắt đầu công việc.
- ▶Làm việc nhanh chóng và suôn sẻ, xem xét trước các phương pháp thí nghiệm để các thao tác của bạn trở nên lặp đi lặp lại và tự động hóa.
- ▶Hạn chế tối đa sự tiếp xúc của chất lỏng với không khí xung quanh.
- ▶Duy trì nhiệt độ ổn định trong phòng thí nghiệm nuôi cấy tế bào nơi bạn làm việc.
Thời gian đăng bài: 03/01/2024