CO2 инкубаторундагы клетка өстүрүүгө температуранын өзгөрүшүнүн таасири
Температура клетка өстүрүүсүндө маанилүү параметр болуп саналат, анткени ал натыйжалардын кайталанышына таасир этет. 37°C жогору же төмөн температуранын өзгөрүшү сүт эмүүчүлөрдүн клеткаларынын өсүү кинетикасына, бактериялык клеткалардагыдай эле, абдан олуттуу таасир этет. Ген экспрессиясынын жана клеткалык түзүлүштүн, клетка циклинин прогрессиясынын, мРНКнын туруктуулугунун өзгөрүүлөрүн сүт эмүүчүлөрдүн клеткаларында 32°C температурада бир сааттан кийин аныктоого болот. Клетканын өсүшүнө түздөн-түз таасир этүүдөн тышкары, температуранын өзгөрүшү чөйрөнүн рН деңгээлине да таасир этет, анткени СО2 эригичтиги рН деңгээлин өзгөртөт (рН төмөнкү температурада жогорулайт). Өстүрүлгөн сүт эмүүчүлөрдүн клеткалары температуранын олуттуу төмөндөшүнө туруштук бере алат. Аларды 4°C температурада бир нече күн сактоого болот жана -196°C чейин тоңууга туруштук бере алат (тиешелүү шарттарды колдонуу менен). Бирок, алар нормадан 2°C жогору температураны бир нече сааттан ашык көтөрө алышпайт жана 40°C жана андан жогору температурада тез өлүшөт. Натыйжалардын максималдуу кайталанышын камсыз кылуу үчүн, клеткалар аман калса дагы, инкубациялоо жана клеткаларды инкубатордун сыртында иштетүү учурунда температураны мүмкүн болушунча туруктуу кармоого кам көрүү керек.
Инкубатордун ичиндеги температуранын өзгөрүшүнүн себептери
Инкубатордун эшиги ачылганда, температура тездик менен 37 °C белгиленген мааниге чейин төмөндөй турганын байкаган чыгарсыз. Жалпысынан алганда, эшик жабылгандан кийин температура бир нече мүнөттүн ичинде калыбына келет. Чындыгында, статикалык культуралар инкубатордо белгиленген температурага чейин калыбына келүү үчүн убакыт талап кылынат. Инкубатордун сыртында иштетилгенден кийин клетка культурасынын температурасын калыбына келтирүү убактысына бир катар факторлор таасир этиши мүмкүн. Бул факторлорго төмөнкүлөр кирет:
- ▶клеткалардын инкубатордон чыккан убактысы
- ▶ клеткалар өстүрүлгөн колбанын түрү (геометрия жылуулуктун өтүшүнө таасир этет)
- ▶Инкубатордогу контейнерлердин саны.
- ▶ Колбалардын болот текчеге түз тийүүсү жылуулук алмашууга жана оптималдуу температурага жетүү ылдамдыгына таасир этет, андыктан колбалардын үймөктөрүн чогултпоо жана ар бир идишти
- ▶ инкубатордун текчесинде түз эле.
Колдонулган ар кандай жаңы идиштердин жана чөйрөлөрдүн баштапкы температурасы клеткалардын оптималдуу абалга келүү убактысына да таасир этет; алардын температурасы канчалык төмөн болсо, ошончолук көп убакыт талап кылынат.
Эгерде бул факторлордун баары убакыттын өтүшү менен өзгөрсө, алар эксперименттердин ортосундагы өзгөрмөлүүлүктү да жогорулатат. Баарын көзөмөлдөө дайыма эле мүмкүн болбосо да (айрыкча, бир нече адам бир эле нерсени колдонуп жатса), температуранын бул өзгөрүүлөрүн минималдаштыруу зарыл.CO2 инкубатору).
Температуранын өзгөрүшүн кантип азайтуу жана температураны калыбына келтирүү убактысын кантип кыскартуу керек
Орточо чөйрөнү алдын ала ысытуу менен
Айрым изилдөөчүлөр колдонуудан мурун ушул температурага жеткирүү үчүн бүтүндөй бөтөлкөлөрдү 37 °C суу мончосунда алдын ала жылытууга көнүп калышкан. Ошондой эле, чөйрөнү клетка өстүрүү үчүн эмес, чөйрөнү алдын ала ысытуу үчүн гана колдонулган инкубатордо алдын ала ысытууга болот, мында чөйрө башка инкубатордогу клетка өстүрүүлөрүн бузбастан оптималдуу температурага жете алат. Бирок, биз билгенден, бул, адатта, жеткиликтүү чыгым эмес.
Инкубатордун ичинде
Инкубатордун эшигин мүмкүн болушунча аз ачып, тезирээк жабыңыз. Инкубатордо температуранын айырмасын жараткан муздак жерлерге жол бербеңиз. Аба айланышы үчүн колбалардын ортосунда боштук калтырыңыз. Инкубатордун ичиндеги текчелерди тешүүгө болот. Бул жылуулуктун жакшы бөлүштүрүлүшүнө мүмкүндүк берет, анткени ал абанын тешиктер аркылуу өтүшүнө мүмкүндүк берет. Бирок, тешиктердин болушу клеткалардын өсүшүндө айырмачылыктарга алып келиши мүмкүн, анткени тешиктери бар аймак менен мета бар аймактын ортосунда температура айырмасы бар. Ушул себептерден улам, эгерде сиздин эксперименттериңиз клетка культурасынын өтө бирдей өсүшүн талап кылса, анда культуралык колбаларды кичинекей контакт беттери бар металл таянычтарга койсоңуз болот, алар кадимки клетка культурасында адатта зарыл эмес.
Клетканы иштетүү убактысын минималдаштыруу
Клетканы дарылоо процессине кеткен убакытты азайтуу үчүн, сизге керек
- ▶Ишти баштоодон мурун бардык керектүү материалдарды жана шаймандарды иретке келтириңиз.
- ▶ Операцияларыңыз кайталануучу жана автоматташтырылган болушу үчүн, эксперименталдык ыкмаларды алдын ала карап чыгып, тез жана жылмакай иштеңиз.
- ▶Суюктуктардын айланадагы аба менен байланышын минималдаштырыңыз.
- ▶Иштеген жериңиздеги клетка өстүрүү лабораториясында туруктуу температураны сактаңыз.
Жарыяланган убактысы: 2024-жылдын 3-январы