Kesan variasi suhu terhadap kultur sel dalam inkubator CO2
Suhu merupakan parameter penting dalam kultur sel kerana ia mempengaruhi kebolehulangan hasil. Perubahan suhu di atas atau di bawah 37°C mempunyai kesan yang sangat ketara terhadap kinetik pertumbuhan sel mamalia, sama seperti sel bakteria. Perubahan dalam ekspresi gen dan pengubahsuaian dalam struktur selular, perkembangan kitaran sel, kestabilan mRNA dapat dikesan dalam sel mamalia selepas satu jam pada suhu 32ºC. Selain mempengaruhi pertumbuhan sel secara langsung, perubahan suhu juga mempengaruhi pH media, kerana keterlarutan CO2 mengubah pH (pH meningkat pada suhu yang lebih rendah). Sel mamalia yang dikultur boleh bertolak ansur dengan penurunan suhu yang ketara. Ia boleh disimpan pada suhu 4°C selama beberapa hari dan boleh bertolak ansur dengan pembekuan hingga -196°C (menggunakan keadaan yang sesuai). Walau bagaimanapun, ia tidak boleh bertolak ansur dengan suhu melebihi kira-kira 2°C di atas normal selama lebih daripada beberapa jam dan akan mati dengan cepat pada suhu 40°C dan ke atas. Untuk memastikan kebolehulangan hasil yang maksimum, walaupun sel-sel itu masih hidup, penjagaan perlu diambil untuk mengekalkan suhu setetap mungkin semasa pengeraman dan pengendalian sel di luar inkubator.
Sebab-sebab perubahan suhu di dalam inkubator
Anda pasti perasan bahawa apabila pintu inkubator dibuka, suhu menurun dengan cepat kepada nilai yang ditetapkan iaitu 37 °C. Secara amnya, suhu akan pulih dalam masa beberapa minit selepas pintu ditutup. Malah, kultur statik memerlukan masa untuk pulih kepada suhu yang ditetapkan dalam inkubator. Beberapa faktor boleh mempengaruhi masa yang diperlukan untuk kultur sel mendapatkan semula suhu selepas rawatan di luar inkubator. Faktor-faktor ini termasuk:
- ▶tempoh masa sel telah keluar dari inkubator
- ▶jenis kelalang tempat sel-sel ditumbuhkan (geometri mempengaruhi pemindahan haba)
- ▶Bilangan bekas dalam inkubator.
- ▶ Sentuhan langsung kelalang dengan rak keluli mempengaruhi pertukaran haba dan kelajuan mencapai suhu optimum, jadi adalah lebih baik untuk mengelakkan timbunan kelalang dan meletakkan setiap bekas
- ▶terus di rak inkubator.
Suhu awal mana-mana bekas dan media segar yang digunakan juga akan mempengaruhi masa yang diperlukan untuk sel berada pada keadaan optimum; semakin rendah suhunya, semakin lama masa yang diperlukan.
Jika semua faktor ini berubah dari semasa ke semasa, ia juga akan meningkatkan kebolehubahan antara eksperimen. Adalah perlu untuk meminimumkan turun naik suhu ini, walaupun tidak selalunya mungkin untuk mengawal semuanya (terutamanya jika beberapa orang menggunakan yang samaInkubator CO2).
Cara meminimumkan variasi suhu dan mengurangkan masa pemulihan suhu
Dengan memanaskan medium terlebih dahulu
Sesetengah penyelidik terbiasa memanaskan keseluruhan botol media dalam mandian air 37 °C untuk mencapai suhu ini sebelum digunakan. Media juga boleh dipanaskan terlebih dahulu dalam inkubator yang hanya digunakan untuk pemanasan awal medium dan bukan untuk kultur sel, di mana medium boleh mencapai suhu optimum tanpa mengganggu kultur sel dalam inkubator lain. Tetapi ini, setahu kami, biasanya bukan perbelanjaan yang berpatutan.
Di dalam Inkubator
Buka pintu inkubator sesedikit mungkin dan tutupnya secepat mungkin. Elakkan tempat sejuk yang mewujudkan perbezaan suhu dalam inkubator. Tinggalkan ruang antara kelalang untuk membolehkan udara beredar. Rak di dalam inkubator boleh berlubang. Ini membolehkan pengagihan haba yang lebih baik kerana ia membolehkan udara melalui lubang. Walau bagaimanapun, kehadiran lubang boleh menyebabkan perbezaan dalam pertumbuhan sel, kerana terdapat perbezaan suhu antara kawasan yang mempunyai lubang dan kawasan yang mempunyai meta. Atas sebab-sebab ini, jika eksperimen anda memerlukan pertumbuhan kultur sel yang sangat seragam, anda boleh meletakkan kelalang kultur pada sokongan logam dengan permukaan sentuhan yang lebih kecil, yang biasanya tidak diperlukan dalam kultur sel rutin.
Meminimumkan Masa Pemprosesan Sel
Untuk meminimumkan masa yang dihabiskan dalam proses rawatan sel, anda perlu
- ▶Susunkan semua bahan dan alatan yang diperlukan sebelum anda mula bekerja.
- ▶Bekerja dengan cepat dan lancar, semak kaedah eksperimen terlebih dahulu supaya operasi anda menjadi berulang dan automatik.
- ▶Minimumkan sentuhan cecair dengan udara ambien.
- ▶Kekalkan suhu yang malar di makmal kultur sel tempat anda bekerja.
Masa siaran: 03-Jan-2024