이산화탄소 배양기에서 온도 변화가 세포 배양에 미치는 영향
온도는 세포 배양에서 결과의 재현성에 영향을 미치는 중요한 변수입니다. 37°C를 기준으로 온도가 오르거나 내리면 세균 세포와 마찬가지로 포유류 세포의 성장 속도에 매우 큰 영향을 미칩니다. 포유류 세포에서는 32°C에서 한 시간만 지나도 유전자 발현 변화, 세포 구조 변형, 세포 주기 진행, mRNA 안정성 등의 변화가 관찰됩니다. 온도 변화는 세포 성장에 직접적인 영향을 미칠 뿐만 아니라, 이산화탄소의 용해도 변화로 인해 배지의 pH에도 영향을 줍니다 (온도가 낮아지면 pH가 증가합니다). 배양된 포유류 세포는 상당한 온도 저하를 견딜 수 있습니다. 4°C에서 며칠 동안 보관할 수 있으며, 적절한 조건 하에서는 -196°C까지 냉동 보관도 가능합니다. 그러나 정상 온도보다 약 2°C 이상 높은 온도에서는 몇 시간 이상 견디지 못하며, 40°C 이상에서는 빠르게 사멸합니다. 결과의 재현성을 최대한 확보하기 위해서는 세포가 생존하더라도 배양기 외부에서 세포를 배양하고 취급하는 동안 온도를 최대한 일정하게 유지하도록 주의해야 합니다.
배양기 내부 온도 변화의 원인
배양기 문을 열면 온도가 설정값인 37°C까지 빠르게 떨어지는 것을 보셨을 겁니다. 일반적으로 문을 닫으면 몇 분 안에 온도가 정상으로 돌아옵니다. 하지만 정지 배양의 경우 배양기 내 설정 온도로 회복하는 데 시간이 필요합니다. 배양기 외부에서 처리 후 세포 배양액이 온도를 회복하는 데 걸리는 시간에 영향을 미치는 요인은 여러 가지가 있습니다. 이러한 요인에는 다음이 포함됩니다.
- ▶세포가 배양기 밖에 있었던 기간
- ▶세포를 배양하는 플라스크의 종류 (플라스크의 기하학적 구조는 열 전달에 영향을 미칩니다)
- ▶배양기 내 용기의 개수.
- ▶플라스크가 스테인리스 선반에 직접 닿으면 열 교환과 최적 온도 도달 속도에 영향을 미치므로 플라스크를 쌓아 올리는 것을 피하고 각 용기를 선반에 놓는 것이 좋습니다.
- ▶배양기 선반 위에 바로 놓으세요.
새로 사용하는 용기와 배지의 초기 온도 또한 세포가 최적 상태에 도달하는 데 걸리는 시간에 영향을 미칩니다. 온도가 낮을수록 시간이 더 오래 걸립니다.
이러한 모든 요인이 시간에 따라 변한다면 실험 간의 변동성 또한 증가할 것입니다. 모든 것을 완벽하게 통제하는 것이 항상 가능하지는 않더라도 (특히 여러 사람이 동일한 장비를 사용하는 경우) 이러한 온도 변동을 최소화하는 것이 필요합니다.CO2 배양기).
온도 변화를 최소화하고 온도 회복 시간을 단축하는 방법
매체를 예열함으로써
일부 연구자들은 사용하기 전에 배지가 담긴 병 전체를 37°C 수조에 넣어 예열하는 방식을 사용합니다. 또한, 세포 배양에는 사용하지 않고 배지 예열 전용 배양기에서 배지를 예열하는 방법도 있습니다. 이 경우 다른 배양기에서 배양 중인 세포에 영향을 주지 않고 배지를 최적 온도로 예열할 수 있습니다. 하지만 저희가 아는 한, 이러한 방식은 일반적으로 비용 부담이 큽니다.
인큐베이터 내부
배양기 문은 가능한 한 짧게 열고 닫되, 닫을 때는 최대한 빨리 닫으십시오. 배양기 내부에 온도 차이를 유발하는 냉점이 생기지 않도록 주의하십시오. 플라스크 사이에는 공기 순환을 위한 공간을 확보하십시오. 배양기 내부 선반에 구멍을 뚫을 수도 있습니다. 구멍을 통해 공기가 통과하여 열 분포가 개선됩니다. 그러나 구멍이 있는 부분은 금속 지지대와 접촉면이 달라져 세포 성장에 차이가 발생할 수 있습니다. 따라서 세포 배양의 균일한 성장이 매우 중요한 실험의 경우, 일반적인 세포 배양에서는 필요하지 않지만 접촉면적이 더 작은 금속 지지대 위에 배양 플라스크를 올려놓을 수 있습니다.
세포 처리 시간 최소화
세포 처리 과정에 소요되는 시간을 최소화하려면 다음이 필요합니다.
- ▶작업을 시작하기 전에 필요한 모든 재료와 도구를 준비하세요.
- ▶실험 방법을 사전에 검토하여 작업이 반복적이고 자동화될 수 있도록 신속하고 원활하게 작업하십시오.
- ▶액체가 주변 공기와 접촉하는 것을 최소화하십시오.
- ▶근무하는 세포 배양 실험실의 온도를 일정하게 유지하십시오.
게시 시간: 2024년 1월 3일