Epekto ng pagkakaiba-iba ng temperatura sa kultura ng selula sa isang incubator ng CO2
Ang temperatura ay isang mahalagang parameter sa cell culture dahil nakakaapekto ito sa reproducibility ng mga resulta. Ang mga pagbabago sa temperatura na higit o mas mababa sa 37°C ay may napakalaking epekto sa kinetics ng paglaki ng cell ng mga mammalian cell, katulad ng sa mga bacterial cell. Ang mga pagbabago sa gene expression at mga pagbabago sa cellular structure, pag-unlad ng cell cycle, at katatagan ng mRNA ay maaaring matukoy sa mga mammalian cell pagkatapos ng isang oras sa 32ºC. Bukod sa direktang epekto sa paglaki ng cell, ang mga pagbabago sa temperatura ay nakakaapekto rin sa pH ng media, dahil ang solubility ng CO2 ay nagbabago sa pH (tumataas ang pH sa mas mababang temperatura). Ang mga cultured mammalian cell ay kayang tiisin ang makabuluhang pagbaba ng temperatura. Maaari silang iimbak sa 4 °C sa loob ng ilang araw at kayang tiisin ang pagyeyelo hanggang -196 °C (gamit ang mga naaangkop na kondisyon). Gayunpaman, hindi nila kayang tiisin ang mga temperatura na higit sa humigit-kumulang 2 °C sa itaas ng normal nang higit sa ilang oras at mabilis na mamamatay sa 40 °C pataas. Upang matiyak ang pinakamataas na reproducibility ng mga resulta, kahit na mabuhay ang mga cell, kailangang mag-ingat upang mapanatili ang temperatura nang pare-pareho hangga't maaari sa panahon ng incubation at paghawak ng mga cell sa labas ng incubator.
Mga dahilan para sa mga pagbabago sa temperatura sa loob ng incubator
Mapapansin mo na kapag binuksan ang pinto ng incubator, mabilis na bumababa ang temperatura sa itinakdang halaga na 37 °C. Sa pangkalahatan, ang temperatura ay babalik sa loob ng ilang minuto pagkatapos isara ang pinto. Sa katunayan, ang mga static culture ay nangangailangan ng oras upang makabalik sa itinakdang temperatura sa incubator. Maraming salik ang maaaring makaapekto sa oras na kinakailangan para mabawi ng isang cell culture ang temperatura pagkatapos ng paggamot sa labas ng incubator. Kabilang sa mga salik na ito ang:
- ▶ang tagal ng panahon na wala na ang mga selula sa incubator
- ▶ang uri ng prasko kung saan pinalalaki ang mga selula (nakakaapekto ang heometriya sa paglipat ng init)
- ▶Bilang ng mga lalagyan sa incubator.
- ▶Ang direktang pagdikit ng mga prasko sa bakal na istante ay nakakaapekto sa pagpapalitan ng init at sa bilis ng pag-abot sa pinakamainam na temperatura, kaya mas mainam na iwasan ang pagtambak ng mga prasko at ilagay ang bawat sisidlan
- ▶direktang nasa istante ng incubator.
Ang panimulang temperatura ng anumang mga bagong lalagyan at media na gagamitin ay makakaapekto rin sa oras na kinakailangan para ang mga selula ay nasa kanilang pinakamainam na estado; mas matagal itong tumatagal kung mas mababa ang kanilang temperatura.
Kung magbabago ang lahat ng mga salik na ito sa paglipas ng panahon, mapapalaki rin nito ang pagkakaiba-iba sa pagitan ng mga eksperimento. Kinakailangang bawasan ang mga pagbabago-bagong temperaturang ito, kahit na hindi laging posible na kontrolin ang lahat (lalo na kung maraming tao ang gumagamit ng parehong...Incubator ng CO2).
Paano mabawasan ang mga pagkakaiba-iba ng temperatura at mabawasan ang oras ng pagbawi mula sa temperatura
Sa pamamagitan ng pag-init muna ng medium
Nakasanayan na ng ilang mananaliksik na painitin muna ang mga buong bote ng media sa isang 37 °C na paliguan ng tubig upang dalhin ang mga ito sa temperaturang ito bago gamitin. Posible ring painitin muna ang medium sa isang incubator na ginagamit lamang para sa pagpapainit ng medium at hindi para sa cell culture, kung saan ang medium ay maaaring umabot sa pinakamainam na temperatura nang hindi ginagambala ang mga cell culture sa ibang incubator. Ngunit ito, sa pagkakaalam natin, ay kadalasang hindi abot-kayang gastos.
Sa loob ng Incubator
Buksan nang kaunti hangga't maaari ang pinto ng incubator at isara ito nang mabilis. Iwasan ang mga malamig na bahagi, na lumilikha ng mga pagkakaiba sa temperatura sa incubator. Mag-iwan ng espasyo sa pagitan ng mga prasko upang payagan ang sirkulasyon ng hangin. Ang mga istante sa loob ng incubator ay maaaring butas-butas. Nagbibigay-daan ito para sa mas mahusay na distribusyon ng init dahil pinapayagan nito ang hangin na dumaan sa mga butas. Gayunpaman, ang pagkakaroon ng mga butas ay maaaring humantong sa mga pagkakaiba sa paglaki ng cell, dahil mayroong pagkakaiba sa temperatura sa pagitan ng lugar na may mga butas at ng lugar na may meta. Para sa mga kadahilanang ito, kung ang iyong mga eksperimento ay nangangailangan ng lubos na pare-parehong paglaki ng cell culture, maaari mong ilagay ang mga culture flask sa mga metal na suporta na may mas maliliit na ibabaw na nakadikit, na karaniwang hindi kinakailangan sa regular na cell culture.
Pagbabawas ng Oras ng Pagproseso ng Cell
Para mabawasan ang oras na ginugugol sa proseso ng paggamot sa selula, kailangan mong
- ▶Ayusin ang lahat ng kinakailangang materyales at kagamitan bago ka magsimulang magtrabaho.
- ▶Magtrabaho nang mabilis at maayos, repasuhin nang maaga ang mga pamamaraan ng eksperimento upang ang iyong mga operasyon ay maging paulit-ulit at awtomatiko.
- ▶Bawasan ang pagkakadikit ng mga likido sa hangin sa paligid.
- ▶Panatilihin ang pare-parehong temperatura sa laboratoryo ng cell culture kung saan ka nagtatrabaho.
Oras ng pag-post: Enero-03-2024