Efeito da variação de temperatura no cultivo celular em uma incubadora de CO2
A temperatura é um parâmetro importante no cultivo celular, pois afeta a reprodutibilidade dos resultados. Variações de temperatura acima ou abaixo de 37 °C têm um efeito muito significativo na cinética de crescimento de células de mamíferos, semelhante ao que ocorre em células bacterianas. Alterações na expressão gênica e modificações na estrutura celular, progressão do ciclo celular e estabilidade do mRNA podem ser detectadas em células de mamíferos após uma hora a 32 °C. Além de afetar diretamente o crescimento celular, as variações de temperatura também afetam o pH do meio, uma vez que a solubilidade do CO₂ altera o pH (o pH aumenta em temperaturas mais baixas). Células de mamíferos cultivadas toleram reduções significativas de temperatura. Elas podem ser armazenadas a 4 °C por vários dias e toleram o congelamento a -196 °C (em condições apropriadas). No entanto, não toleram temperaturas acima de cerca de 2 °C por mais de algumas horas e morrem rapidamente a 40 °C ou mais. Para garantir a máxima reprodutibilidade dos resultados, mesmo que as células sobrevivam, é necessário tomar cuidado para manter a temperatura o mais constante possível durante a incubação e o manuseio das células fora da incubadora.
Motivos para variações de temperatura dentro da incubadora
Você deve ter notado que, ao abrir a porta da incubadora, a temperatura cai rapidamente para o valor definido de 37 °C. Em geral, a temperatura se recupera em poucos minutos após o fechamento da porta. Na verdade, culturas estáticas precisam de tempo para atingir a temperatura definida dentro da incubadora. Diversos fatores podem afetar o tempo necessário para que uma cultura celular recupere a temperatura após o tratamento fora da incubadora. Esses fatores incluem:
- ▶o período de tempo em que as células estiveram fora da incubadora
- ▶O tipo de frasco em que as células são cultivadas (a geometria afeta a transferência de calor)
- ▶Número de recipientes na incubadora.
- ▶O contato direto dos frascos com a prateleira de aço afeta a troca de calor e a velocidade com que a temperatura ideal é atingida, portanto, é melhor evitar o empilhamento de frascos e posicionar cada recipiente individualmente.
- ▶diretamente na prateleira da incubadora.
A temperatura inicial de quaisquer recipientes e meios de cultura novos utilizados também afetará o tempo necessário para que as células atinjam seu estado ideal; quanto menor a temperatura, mais tempo levará.
Se todos esses fatores mudarem com o tempo, também aumentarão a variabilidade entre os experimentos. É necessário minimizar essas flutuações de temperatura, mesmo que nem sempre seja possível controlar tudo (principalmente se várias pessoas estiverem usando o mesmo equipamento).incubadora de CO2).
Como minimizar as variações de temperatura e reduzir o tempo de recuperação da temperatura.
Ao pré-aquecer o meio
Alguns pesquisadores têm o hábito de pré-aquecer frascos inteiros de meio de cultura em banho-maria a 37 °C para atingir essa temperatura antes do uso. Também é possível pré-aquecer o meio em uma incubadora dedicada exclusivamente ao pré-aquecimento de meios de cultura, e não ao cultivo celular, onde o meio pode atingir a temperatura ideal sem interferir no cultivo celular em outra incubadora. No entanto, pelo que sabemos, essa opção geralmente não é viável economicamente.
Dentro da Incubadora
Abra a porta da incubadora o mínimo possível e feche-a rapidamente. Evite pontos frios, que criam diferenças de temperatura dentro da incubadora. Deixe espaço entre os frascos para permitir a circulação de ar. As prateleiras internas da incubadora podem ser perfuradas. Isso permite uma melhor distribuição de calor, pois possibilita a passagem de ar pelos orifícios. No entanto, a presença de furos pode levar a diferenças no crescimento celular, devido à diferença de temperatura entre a área com furos e a área sem furos. Por esses motivos, se seus experimentos exigirem um crescimento altamente uniforme da cultura celular, você pode colocar os frascos de cultura em suportes metálicos com superfícies de contato menores, o que geralmente não é necessário em culturas celulares de rotina.
Minimizar o tempo de processamento celular
Para minimizar o tempo gasto no processo de tratamento celular, você precisa de
- ▶Organize todos os materiais e ferramentas necessários antes de começar a trabalhar.
- ▶Trabalhe com rapidez e eficiência, revisando os métodos experimentais com antecedência para que suas operações se tornem repetitivas e automatizadas.
- ▶Minimize o contato de líquidos com o ar ambiente.
- ▶Mantenha uma temperatura constante no laboratório de cultura de células onde você trabalha.
Data da publicação: 03/01/2024