CO2 inkübatöründe sıcaklık değişiminin hücre kültürü üzerindeki etkisi
Hücre kültüründe sıcaklık, sonuçların tekrarlanabilirliğini etkilediği için önemli bir parametredir. 37°C'nin üstünde veya altında meydana gelen sıcaklık değişimleri, bakteri hücrelerinde olduğu gibi memeli hücrelerinin büyüme kinetiği üzerinde çok önemli bir etkiye sahiptir. 32°C'de bir saat sonra memeli hücrelerinde gen ekspresyonunda değişiklikler, hücresel yapıda modifikasyonlar, hücre döngüsü ilerlemesi ve mRNA stabilitesinde değişiklikler tespit edilebilir. Sıcaklık değişimleri, hücre büyümesini doğrudan etkilemenin yanı sıra, CO2'nin çözünürlüğü pH'ı değiştirdiği için ortamın pH'ını da etkiler (pH daha düşük sıcaklıklarda artar). Kültüre alınmış memeli hücreleri önemli sıcaklık düşüşlerine dayanabilir. Birkaç gün boyunca 4°C'de saklanabilir ve (uygun koşullar kullanılarak) -196°C'ye kadar donmaya dayanabilirler. Bununla birlikte, normalin yaklaşık 2°C üzerindeki sıcaklıklara birkaç saatten fazla dayanamazlar ve 40°C ve üzerindeki sıcaklıklarda hızla ölürler. Hücreler hayatta kalsa bile sonuçların maksimum düzeyde tekrarlanabilirliğini sağlamak için, kuluçka süresi boyunca ve hücrelerin kuluçka makinesi dışında işlenmesi sırasında sıcaklığın mümkün olduğunca sabit tutulmasına özen gösterilmelidir.
Kuluçka makinesi içindeki sıcaklık değişimlerinin nedenleri
Kuluçka makinesinin kapağı açıldığında sıcaklığın hızla 37 °C'lik ayarlanan değere düştüğünü fark etmişsinizdir. Genel olarak, kapak kapatıldıktan sonra sıcaklık birkaç dakika içinde normale döner. Aslında, statik kültürlerin kuluçka makinesinde ayarlanan sıcaklığa ulaşması zaman alır. Hücre kültürünün kuluçka makinesi dışında işlem gördükten sonra sıcaklığını yeniden kazanması için geçen süreyi etkileyebilecek bir dizi faktör vardır. Bu faktörler şunlardır:
- ▶Hücrelerin kuluçka makinesinden çıkarıldıktan sonra geçen süre
- ▶Hücrelerin yetiştirildiği şişenin türü (geometri ısı transferini etkiler)
- ▶Kuluçka makinesindeki kap sayısı.
- ▶Şişelerin çelik rafla doğrudan teması ısı alışverişini ve optimum sıcaklığa ulaşma hızını etkilediğinden, şişeleri üst üste yığmaktan kaçınmak ve her bir kabı ayrı ayrı yerleştirmek daha iyidir.
- ▶Doğrudan kuluçka makinesinin rafına.
Kullanılan yeni kapların ve ortamın başlangıç sıcaklığı da hücrelerin optimum duruma ulaşması için gereken süreyi etkiler; sıcaklık ne kadar düşükse, bu süre o kadar uzun olur.
Bu faktörlerin tümü zaman içinde değişirse, deneyler arasındaki değişkenlik de artacaktır. Her şeyi kontrol etmek her zaman mümkün olmasa bile (özellikle aynı cihazı birden fazla kişi kullanıyorsa), bu sıcaklık dalgalanmalarını en aza indirmek gereklidir.CO2 kuluçka makinesi).
Sıcaklık değişimlerini en aza indirmek ve sıcaklık toparlanma süresini kısaltmak için neler yapılabilir?
Ortamı önceden ısıtarak
Bazı araştırmacılar, kullanımdan önce ortam şişelerinin tamamını 37 °C'lik bir su banyosunda önceden ısıtarak bu sıcaklığa getirmeye alışkındır. Ortamı, sadece ortam ön ısıtması için kullanılan ve hücre kültürü için kullanılmayan bir inkübatörde önceden ısıtmak da mümkündür; bu sayede ortam, başka bir inkübatördeki hücre kültürlerini rahatsız etmeden optimum sıcaklığa ulaşabilir. Ancak bildiğimiz kadarıyla bu, genellikle karşılanabilir bir masraf değildir.
Kuluçka Makinesinin İçinde
İnkübatör kapağını mümkün olduğunca az açın ve mümkün olduğunca çabuk kapatın. İnkübatörde sıcaklık farklılıklarına neden olan soğuk noktaları önleyin. Hava sirkülasyonu için şişeler arasında boşluk bırakın. İnkübatörün içindeki raflar delikli olabilir. Bu, deliklerden havanın geçmesine izin verdiği için daha iyi ısı dağılımı sağlar. Bununla birlikte, deliklerin varlığı, delikli alan ile metal alan arasında sıcaklık farkı olduğu için hücre büyümesinde farklılıklara yol açabilir. Bu nedenlerle, deneyleriniz hücre kültürünün son derece homojen büyümesini gerektiriyorsa, kültür şişelerini daha küçük temas yüzeylerine sahip metal destekler üzerine yerleştirebilirsiniz; bu, rutin hücre kültüründe genellikle gerekli değildir.
Hücre İşleme Süresini En Aza İndirme
Hücre tedavi sürecinde harcanan zamanı en aza indirmek için şunları yapmanız gerekir:
- ▶Çalışmaya başlamadan önce gerekli tüm malzemeleri ve aletleri düzenleyin.
- ▶İşlemlerinizi tekrarlanabilir ve otomatik hale getirmek için deneysel yöntemleri önceden gözden geçirerek hızlı ve sorunsuz bir şekilde çalışın.
- ▶Sıvıların ortam havasıyla temasını en aza indirin.
- ▶Çalıştığınız hücre kültürü laboratuvarında sabit bir sıcaklık sağlayın.
Yayın tarihi: 03 Ocak 2024