Efecto de la variación de temperatura en el cultivo celular en una incubadora de CO2.
La temperatura es un parámetro importante en el cultivo celular, ya que afecta la reproducibilidad de los resultados. Las variaciones de temperatura por encima o por debajo de 37 °C tienen un efecto muy significativo en la cinética de crecimiento de las células de mamíferos, similar al de las células bacterianas. Se pueden detectar cambios en la expresión génica y modificaciones en la estructura celular, la progresión del ciclo celular y la estabilidad del ARNm en células de mamíferos tras una hora a 32 °C. Además de afectar directamente al crecimiento celular, los cambios de temperatura también afectan al pH del medio, ya que la solubilidad del CO₂ altera el pH (el pH aumenta a temperaturas más bajas). Las células de mamíferos cultivadas pueden tolerar descensos de temperatura significativos. Se pueden almacenar a 4 °C durante varios días y toleran la congelación hasta -196 °C (en condiciones adecuadas). Sin embargo, no toleran temperaturas superiores a unos 2 °C por encima de lo normal durante más de unas horas y mueren rápidamente a 40 °C o más. Para garantizar la máxima reproducibilidad de los resultados, incluso si las células sobreviven, es necesario tener cuidado de mantener la temperatura lo más constante posible durante la incubación y la manipulación de las células fuera de la incubadora.
Causas de las variaciones de temperatura dentro de la incubadora
Habrás notado que cuando se abre la puerta de la incubadora, la temperatura desciende rápidamente al valor establecido de 37 °C. En general, la temperatura se recupera en pocos minutos después de cerrar la puerta. De hecho, los cultivos estáticos necesitan tiempo para recuperar la temperatura establecida en la incubadora. Varios factores pueden afectar el tiempo que tarda un cultivo celular en recuperar la temperatura después del tratamiento fuera de la incubadora. Estos factores incluyen:
- ▶el tiempo que las células han estado fuera de la incubadora
- ▶El tipo de matraz en el que se cultivan las células (la geometría afecta la transferencia de calor).
- ▶Número de contenedores en la incubadora.
- ▶El contacto directo de los matraces con el estante de acero afecta el intercambio de calor y la velocidad para alcanzar la temperatura óptima, por lo que es mejor evitar apilar los matraces y colocar cada recipiente por separado.
- ▶directamente en el estante de la incubadora.
La temperatura inicial de los recipientes y medios de cultivo nuevos también afectará al tiempo que tardan las células en alcanzar su estado óptimo; cuanto menor sea la temperatura, más tiempo tardarán.
Si todos estos factores cambian con el tiempo, también aumentarán la variabilidad entre experimentos. Es necesario minimizar estas fluctuaciones de temperatura, aunque no siempre sea posible controlarlo todo (especialmente si varias personas están usando el mismo equipo).incubadora de CO2).
Cómo minimizar las variaciones de temperatura y reducir el tiempo de recuperación de la temperatura.
Precalentando el medio
Algunos investigadores suelen precalentar frascos enteros de medio de cultivo en un baño de agua a 37 °C para que alcancen esta temperatura antes de usarlos. También es posible precalentar el medio en una incubadora dedicada exclusivamente a este fin y no al cultivo celular, donde el medio puede alcanzar la temperatura óptima sin afectar los cultivos celulares en otra incubadora. Sin embargo, por lo que sabemos, esto suele ser un gasto considerable.
Dentro de la incubadora
Abra la puerta de la incubadora lo menos posible y ciérrela rápidamente. Evite los puntos fríos, que crean diferencias de temperatura en la incubadora. Deje espacio entre los matraces para permitir la circulación del aire. Los estantes dentro de la incubadora pueden estar perforados. Esto permite una mejor distribución del calor, ya que deja pasar el aire a través de los orificios. Sin embargo, la presencia de orificios puede provocar diferencias en el crecimiento celular, debido a la diferencia de temperatura entre la zona perforada y la zona sin perforar. Por estas razones, si sus experimentos requieren un crecimiento altamente uniforme del cultivo celular, puede colocar los matraces de cultivo sobre soportes metálicos con superficies de contacto más pequeñas, que generalmente no son necesarios en el cultivo celular rutinario.
Minimizar el tiempo de procesamiento celular
Para minimizar el tiempo empleado en el proceso de tratamiento celular, es necesario
- ▶Organiza todos los materiales y herramientas necesarios antes de empezar a trabajar.
- ▶Trabaje con rapidez y fluidez, revisando los métodos experimentales con antelación para que sus operaciones se vuelvan repetitivas y automatizadas.
- ▶Minimizar el contacto de los líquidos con el aire ambiente.
- ▶Mantenga una temperatura constante en el laboratorio de cultivo celular donde trabaja.
Fecha de publicación: 3 de enero de 2024