Efecte de la variació de temperatura en el cultiu cel·lular
La temperatura és un paràmetre important en el cultiu cel·lular perquè afecta la reproductibilitat dels resultats. Els canvis de temperatura per sobre o per sota dels 37 °C tenen un efecte molt significatiu en la cinètica de creixement cel·lular de les cèl·lules de mamífers, similar al de les cèl·lules bacterianes. Els canvis en l'expressió gènica i les modificacions en l'estructura cel·lular, la progressió del cicle cel·lular i l'estabilitat de l'ARNm es poden detectar en cèl·lules de mamífers després d'una hora a 32 °C. A més d'afectar directament el creixement cel·lular, els canvis de temperatura també afecten el pH del medi, ja que la solubilitat del CO2 altera el pH (el pH augmenta a temperatures més baixes). Les cèl·lules de mamífers cultivades poden tolerar disminucions significatives de temperatura. Es poden emmagatzemar a 4 °C durant diversos dies i poden tolerar la congelació fins a -196 °C (utilitzant les condicions adequades). Tanmateix, no poden tolerar temperatures superiors a uns 2 °C per sobre del normal durant més d'unes poques hores i moriran ràpidament a 40 °C i més. Per garantir la màxima reproductibilitat dels resultats, fins i tot si les cèl·lules sobreviuen, cal tenir cura de mantenir la temperatura el més constant possible durant la incubació i la manipulació de les cèl·lules fora de la incubadora.
Raons de les variacions de temperatura dins de la incubadora
Haureu notat que quan s'obre la porta de la incubadora, la temperatura baixa ràpidament fins al valor establert de 37 °C. En general, la temperatura es recuperarà en pocs minuts després de tancar la porta. De fet, els cultius estàtics necessiten temps per recuperar la temperatura establerta a la incubadora. Diversos factors poden afectar el temps que triga un cultiu cel·lular a recuperar la temperatura després del tractament fora de la incubadora. Aquests factors inclouen:
- ▶ el temps que les cèl·lules han estat fora de la incubadora
- ▶el tipus de matràs en què es cultiven les cèl·lules (la geometria afecta la transferència de calor)
- ▶Nombre de contenidors a la incubadora.
- ▶El contacte directe dels matrassos amb la reixeta d'acer afecta l'intercanvi de calor i la velocitat per assolir la temperatura òptima, per la qual cosa és millor evitar piles de matrassos i col·locar cada recipient
- ▶directament a la prestatgeria de la incubadora.
La temperatura inicial de qualsevol recipient i medi fresc utilitzat també afectarà el temps que triguen les cèl·lules a estar en el seu estat òptim; com més baixa sigui la seva temperatura, més temps trigarà.
Si tots aquests factors canvien amb el temps, també augmentaran la variabilitat entre experiments. Cal minimitzar aquestes fluctuacions de temperatura, fins i tot si no sempre és possible controlar-ho tot (sobretot si diverses persones utilitzen la mateixa incubadora).
Com minimitzar les variacions de temperatura i reduir el temps de recuperació de la temperatura
Preescalfant el medi
Alguns investigadors estan acostumats a preescalfar ampolles senceres de medi en un bany d'aigua a 37 °C per portar-les a aquesta temperatura abans d'utilitzar-les. També és possible preescalfar el medi en una incubadora que només s'utilitza per al preescalfament del medi i no per al cultiu cel·lular, on el medi pot assolir una temperatura òptima sense pertorbar els cultius cel·lulars en una altra incubadora. Però això, pel que sabem, no sol ser una despesa assequible.
Dins de la incubadora
Obriu la porta de la incubadora el mínim possible i tanqueu-la el més ràpidament possible. Eviteu els punts freds, que creen diferències de temperatura a la incubadora. Deixeu espai entre els matrassos per permetre que l'aire circuli. Les prestatgeries de l'interior de la incubadora es poden perforar. Això permet una millor distribució de la calor, ja que permet que l'aire passi pels forats. Tanmateix, la presència de forats pot provocar diferències en el creixement cel·lular, perquè hi ha una diferència de temperatura entre la zona amb forats i la zona amb meta. Per aquestes raons, si els vostres experiments requereixen un creixement molt uniforme del cultiu cel·lular, podeu col·locar els matrassos de cultiu en suports metàl·lics amb superfícies de contacte més petites, que normalment no són necessàries en el cultiu cel·lular rutinari.
Minimitzar el temps de processament cel·lular
Per minimitzar el temps dedicat al procés de tractament cel·lular, cal
- ▶ Organitza tots els materials i eines necessaris abans de començar a treballar.
- ▶Treballa de manera ràpida i fluida, revisant els mètodes experimentals amb antelació per tal que les teves operacions es tornin repetitives i automatitzades.
- ▶Minimitzar el contacte dels líquids amb l'aire ambient.
- ▶Mantingueu una temperatura constant al laboratori de cultius cel·lulars on treballeu.
Data de publicació: 03-01-2024