Temperatuuri varieerumise mõju rakukultuurile
Temperatuur on rakukultuuris oluline parameeter, kuna see mõjutab tulemuste reprodutseeritavust. Temperatuurimuutused üle või alla 37 °C avaldavad imetajarakkude kasvukineetikale väga olulist mõju, sarnaselt bakterirakkude omale. Geeniekspressiooni muutusi ja rakustruktuuri modifikatsioone, rakutsükli kulgu ja mRNA stabiilsust saab imetajarakkudes tuvastada ühe tunni möödudes temperatuuril 32 °C. Lisaks rakkude kasvu otsesele mõjutamisele mõjutavad temperatuurimuutused ka söötme pH-d, kuna CO2 lahustuvus muudab pH-d (pH tõuseb madalamatel temperatuuridel). Kultiveeritud imetajarakud taluvad märkimisväärset temperatuuri langust. Neid saab säilitada temperatuuril 4 °C mitu päeva ja nad taluvad külmutamist temperatuurini -196 °C (sobivate tingimuste kasutamisel). Siiski ei talu nad temperatuuri üle umbes 2 °C üle normi kauem kui paar tundi ja surevad kiiresti temperatuuril 40 °C ja üle selle. Tulemuste maksimaalse reprodutseeritavuse tagamiseks tuleb isegi rakkude ellujäämise korral hoolitseda selle eest, et temperatuur inkubatsiooni ja rakkude käitlemise ajal väljaspool inkubaatorit oleks võimalikult konstantne.
Inkubaatoris temperatuuri kõikumise põhjused
Olete ehk märganud, et inkubaatori ukse avamisel langeb temperatuur kiiresti seatud väärtusele 37 °C. Üldiselt taastub temperatuur mõne minuti jooksul pärast ukse sulgemist. Tegelikult vajavad staatilised kultuurid inkubaatoris seatud temperatuurini taastumiseks aega. Aega, mis kulub rakukultuuri temperatuuri taastamiseks pärast inkubaatorivälist töötlemist, võib mõjutada mitmed tegurid. Nende tegurite hulka kuuluvad:
- ▶aeg, mille jooksul rakud on inkubaatorist väljas olnud
- ▶kolvi tüüp, milles rakke kasvatatakse (geomeetria mõjutab soojusülekannet)
- ▶Inkubaatoris olevate konteinerite arv.
- ▶ Kolbide otsene kokkupuude terasriiuliga mõjutab soojusvahetust ja optimaalse temperatuuri saavutamise kiirust, seega on parem vältida kolbide virnastamist ja asetada iga anum
- ▶otse inkubaatori riiulil.
Kõikide värskete konteinerite ja kasutatavate söötmete algtemperatuur mõjutab ka aega, mis kulub rakkude optimaalse oleku saavutamiseks; mida madalam on nende temperatuur, seda kauem see aega võtab.
Kui kõik need tegurid aja jooksul muutuvad, suurendavad need ka katsetevahelist varieeruvust. Neid temperatuurikõikumisi on vaja minimeerida, isegi kui kõike pole alati võimalik kontrollida (eriti kui sama inkubaatorit kasutab mitu inimest).
Kuidas minimeerida temperatuuri kõikumisi ja lühendada temperatuuri taastumise aega
Keskkonna eelsoojendamisega
Mõned teadlased on harjunud enne kasutamist terveid söötmepudeleid 37 °C veevannis eelsoojendama, et need selle temperatuurini jõuaksid. Samuti on võimalik söödet eelsoojendada inkubaatoris, mida kasutatakse ainult söötme eelsoojendamiseks, mitte rakukultuuri jaoks, kus sööde saavutab optimaalse temperatuuri ilma teises inkubaatoris olevaid rakukultuure häirimata. Kuid meie teada pole see tavaliselt taskukohane kulu.
Inkubaatori sees
Ava inkubaatori ust nii vähe kui võimalik ja sulge see nii kiiresti kui võimalik. Väldi külmi kohti, mis tekitavad inkubaatoris temperatuurierinevusi. Jäta kolbide vahele ruumi, et õhk saaks ringelda. Inkubaatori sees olevad riiulid võivad olla perforeeritud. See võimaldab paremat soojusjaotust, kuna õhk pääseb läbi aukude. Aukude olemasolu võib aga põhjustada rakkude kasvu erinevusi, kuna aukudega ala ja meta-ala vahel on temperatuurierinevus. Nendel põhjustel, kui sinu katsed nõuavad rakukultuuri väga ühtlast kasvu, võid kultuurikolvid asetada väiksemate kontaktpindadega metalltugedele, mis tavapärases rakukultuuris tavaliselt vajalikud ei ole.
Rakkude töötlemise aja minimeerimine
Rakkude töötlemise protsessile kuluva aja minimeerimiseks peate
- ▶ Enne töö alustamist pange valmis kõik vajalikud materjalid ja tööriistad.
- ▶Töötage kiiresti ja sujuvalt, vaadates katsemeetodid eelnevalt üle, et teie tegevused muutuksid korduvateks ja automatiseeritud.
- ▶ Minimeerige vedelike kokkupuudet ümbritseva õhuga.
- ▶ Hoidke rakukultuuri laboris, kus te töötate, ühtlast temperatuuri.
Postituse aeg: 03.01.2024