Tenperatura-aldaketaren eragina zelula-kulturan
Tenperatura parametro garrantzitsua da zelula-kulturan, emaitzen erreproduzigarritasunean eragina baitu. 37 °C-tik gorako edo beherako tenperatura-aldaketek eragin handia dute ugaztunen zelulen hazkuntza-zinetikan, bakterio-zelulen antzera. Geneen adierazpenaren aldaketak eta zelulen egituraren, zelula-zikloaren progresioaren eta mRNAren egonkortasunaren aldaketak ugaztunen zeluletan detektatu daitezke 32 °C-tan ordubete igaro ondoren. Zelulen hazkuntzan zuzenean eragiteaz gain, tenperatura-aldaketek ingurunearen pH-an ere eragina dute, CO2-aren disolbagarritasunak pH-a aldatzen baitu (pH-a handitzen da tenperatura baxuagoetan). Kultibatutako ugaztunen zelulek tenperatura-jaitsiera nabarmenak jasan ditzakete. 4 °C-tan gorde daitezke hainbat egunez eta -196 °C-raino izoztea jasan dezakete (baldintza egokiak erabiliz). Hala ere, ezin dituzte normalaren gainetik 2 °C inguruko tenperaturak jasan ordu batzuk baino gehiagoz eta azkar hilko dira 40 °C-tan eta hortik gora. Emaitzen erreproduzigarritasun handiena bermatzeko, zelulak bizirik iraun arren, kontuz ibili behar da tenperatura ahalik eta konstanteen mantentzeko zelulen inkubazioan eta manipulazioan inkubagailutik kanpo.
Inkubagailuaren barruko tenperatura aldaketen arrazoiak
Ohartuko zinen inkubagailuaren atea irekitzean, tenperatura azkar jaisten dela ezarritako 37 °C-ko baliora. Oro har, tenperatura atea itxi eta minutu gutxiren buruan berreskuratuko da. Izan ere, kultibo estatikoek denbora behar dute inkubagailuan ezarritako tenperaturara berreskuratzeko. Hainbat faktorek eragin dezakete zelula-kultibo batek inkubagailutik kanpo tratamendua jaso ondoren tenperatura berreskuratzeko behar duen denboran. Faktore horien artean daude:
- ▶Zelulak inkubagailutik kanpo egon diren denbora
- ▶Zelulak hazten diren matraze mota (geometriak bero-transferentzian eragina du)
- ▶Inkubagailuan dauden ontzi kopurua.
- ▶Matrazeen eta altzairuzko apalaren arteko kontaktu zuzenak bero-trukea eta tenperatura optimoa lortzeko abiadura eragiten ditu, beraz, hobe da matrazeen pilaketak saihestea eta ontzi bakoitza kokatzea
- ▶Inkubagailuaren apalean zuzenean.
Erabilitako ontzi eta medio freskoen hasierako tenperaturak ere eragina izango du zelulek egoera optimoan egoteko behar duten denboran; zenbat eta tenperatura baxuagoa izan, orduan eta denbora gehiago beharko da.
Faktore horiek guztiak denboran zehar aldatzen badira, esperimentuen arteko aldakortasuna ere handituko dute. Tenperatura-gorabehera horiek minimizatzea beharrezkoa da, nahiz eta ez den beti posible dena kontrolatzea (batez ere hainbat pertsona inkubagailu bera erabiltzen ari badira).
Nola minimizatu tenperatura aldaketak eta murriztu tenperatura berreskuratzeko denbora
Medioa aldez aurretik berotuz
Ikerlari batzuk ohituta daude hazkuntza-inkubagailuko botila osoak 37 °C-ko ur-bainu batean berotzera, tenperatura horretara eramateko erabili aurretik. Era berean, posible da hazkuntza-inkubagailu batean berotzea, hazkuntza-inkubagailu horretan bakarrik berotzeko erabiltzen dena eta ez zelula-kulturarako, non hazkuntza-inkubagailu bateko zelula-kulturak nahastu gabe tenperatura optimoa lor dezakeen. Baina, dakigunez, hau ez da normalean gastu ordaindu beharrekoa.
Inkubagailuaren barruan.
Ireki inkubagailuaren atea ahalik eta gutxien eta itxi azkarren. Saihestu puntu hotzak, tenperatura-aldeak sortzen baitituzte inkubagailuan. Utzi tartea matrazeen artean airea zirkulatzeko. Inkubagailuaren barruko apalak zulatu daitezke. Horrek beroa hobeto banatzea ahalbidetzen du, airea zuloetatik igarotzea ahalbidetzen baitu. Hala ere, zuloen presentziak zelulen hazkuntzan aldeak eragin ditzake, zuloak dituen eremuaren eta metadun eremuaren artean tenperatura-aldea baitago. Arrazoi hauengatik, zure esperimentuek zelula-kulturaren hazkuntza oso uniformea behar badute, kultura-matrazeak kontaktu-azalera txikiagoak dituzten metalezko euskarrietan jar ditzakezu, eta horiek ez dira normalean beharrezkoak ohiko zelula-kulturan.
Zelulen prozesatzeko denbora minimizatzea
Zelulen tratamendu prozesuan ematen den denbora minimizatzeko, beharrezkoa da
- ▶ Lanean hasi aurretik, antolatu beharrezko material eta tresna guztiak.
- ▶Lan egin azkar eta leunki, metodo esperimentalak aldez aurretik berrikusiz, zure eragiketak errepikakorrak eta automatizatuak izan daitezen.
- ▶Likidoen eta inguruko airearen arteko kontaktua minimizatu.
- ▶Mantendu tenperatura konstante bat lan egiten duzun zelula-kultura laborategian.
Argitaratze data: 2024ko urtarrilaren 3a