A hőmérsékletváltozás hatása a sejtkultúrára
A hőmérséklet fontos paraméter a sejtkultúrában, mivel befolyásolja az eredmények reprodukálhatóságát. A 37°C feletti vagy alatti hőmérsékletváltozások nagyon jelentős hatással vannak az emlőssejtek növekedési kinetikájára, hasonlóan a baktériumsejtekéhez. Az emlőssejtekben egy óra 32°C-on történő inkubáció után kimutathatók a génexpresszió változásai és a sejtszerkezet módosulásai, a sejtciklus progressziója, az mRNS stabilitása. A sejtnövekedés közvetlen befolyásolása mellett a hőmérsékletváltozás a táptalaj pH-értékét is befolyásolja, mivel a CO2 oldhatósága megváltoztatja a pH-értéket (a pH alacsonyabb hőmérsékleten növekszik). A tenyésztett emlőssejtek jelentős hőmérséklet-csökkenést is elviselnek. 4°C-on több napig tárolhatók, és megfelelő körülmények között -196°C-ra fagyaszthatók. Azonban a normál értékhez képest körülbelül 2°C-kal magasabb hőmérsékletet néhány óránál tovább nem tolerálják, és 40°C-on és afelett gyorsan elpusztulnak. Az eredmények maximális reprodukálhatóságának biztosítása érdekében, még ha a sejtek túlélik is, ügyelni kell arra, hogy a hőmérsékletet a lehető legállandóbb szinten tartsuk az inkubáció és a sejtek inkubátoron kívüli kezelése során.
Az inkubátorban a hőmérséklet-ingadozások okai
Észrevehette már, hogy az inkubátor ajtajának kinyitásakor a hőmérséklet gyorsan visszaesik a beállított 37 °C-os értékre. Általában a hőmérséklet néhány percen belül helyreáll az ajtó bezárása után. Valójában a statikus tenyészeteknek időre van szükségük ahhoz, hogy az inkubátorban visszanyerjék a beállított hőmérsékletet. Számos tényező befolyásolhatja azt az időt, amely alatt a sejtkultúra visszanyeri a hőmérsékletét az inkubátoron kívüli kezelés után. Ezek a tényezők a következők:
- ▶az az időtartam, ameddig a sejtek nincsenek az inkubátorban
- ▶a sejtek tenyésztésére használt lombik típusa (a geometria befolyásolja a hőátadást)
- ▶A tartályok száma az inkubátorban.
- ▶A lombikok acélpolccal való közvetlen érintkezése befolyásolja a hőcserét és az optimális hőmérséklet elérésének sebességét, ezért jobb elkerülni a lombikok egymásra helyezését, és minden edényt
- ▶közvetlenül az inkubátor polcára.
A frissen használt tartályok és táptalajok kezdeti hőmérséklete is befolyásolja azt az időt, amely alatt a sejtek optimális állapotba kerülnek; minél alacsonyabb a hőmérsékletük, annál tovább tart ez.
Ha ezek a tényezők idővel változnak, akkor a kísérletek közötti változékonyságot is növelik. Szükséges minimalizálni ezeket a hőmérséklet-ingadozásokat, még akkor is, ha nem mindig lehetséges mindent kontrollálni (különösen, ha többen használják ugyanazt az inkubátort).
Hogyan minimalizáljuk a hőmérséklet-ingadozásokat és csökkentsük a hőmérséklet-helyreállítási időt?
A közeg előmelegítésével
Egyes kutatók hozzászoktak ahhoz, hogy a táptalajt tartalmazó teljes üvegeket 37 °C-os vízfürdőben előmelegítsék, hogy felhasználás előtt elérjék ezt a hőmérsékletet. Az is lehetséges, hogy a táptalajt egy olyan inkubátorban előmelegítik, amelyet csak a táptalaj előmelegítésére használnak, és nem sejtkultúrára, így a táptalaj optimális hőmérsékletet érhet el anélkül, hogy egy másik inkubátorban lévő sejtkultúrákat megzavarná. De ez, amennyire tudjuk, általában nem megfizethető költség.
Az inkubátor belsejében
Az inkubátor ajtaját a lehető legkevesebbszer nyisd ki, és a lehető leggyorsabban csukd be. Kerüld a hideg pontokat, amelyek hőmérséklet-különbséget okoznak az inkubátorban. Hagyj helyet a lombikok között, hogy a levegő keringhessen. Az inkubátor belsejében lévő polcok perforáltak lehetnek. Ez jobb hőeloszlást tesz lehetővé, mivel lehetővé teszi a levegő áthaladását a lyukakon. A lyukak jelenléte azonban a sejtek növekedésében eltérésekhez vezethet, mivel hőmérséklet-különbség van a lyukakkal ellátott terület és a metaréteggel ellátott terület között. Ezen okok miatt, ha a kísérleteid a sejtkultúra nagyon egyenletes növekedését igénylik, a tenyésztő lombikokat kisebb érintkezési felületű fémtartókra helyezheted, amelyekre általában nincs szükség a rutin sejtkultúrában.
A sejtfeldolgozási idő minimalizálása
A sejtkezelési folyamatban eltöltött idő minimalizálása érdekében a következőkre van szükség:
- ▶ A munka megkezdése előtt készítse elő az összes szükséges anyagot és eszközt.
- ▶Gyorsan és gördülékenyen dolgozzon, előzetesen tekintse át a kísérleti módszereket, hogy a műveletek ismétlődővé és automatizálttá váljanak.
- ▶ Minimalizálja a folyadékok környezeti levegővel való érintkezését.
- ▶ Tartsa fenn az állandó hőmérsékletet a sejtkultúra-laboratóriumban, ahol dolgozik.
Közzététel ideje: 2024. január 3.