中文
A hőmérsékleti variáció hatása a sejttenyészetre
A hőmérséklet fontos paraméter a sejttenyészetben, mivel befolyásolja az eredmények reprodukálhatóságát. A 37 ° C feletti vagy alatti hőmérsékleti változások nagyon szignifikáns hatással vannak az emlős sejtek sejtnövekedés -kinetikájára, hasonlóan a baktériumsejtekhez. A gén expressziójának és a sejtek szerkezetének módosításának változásai, a sejtciklus progressziója, az mRNS stabilitása detektálható az emlős sejtekben egy óra múlva 32 ° C -on. Amellett, hogy közvetlenül befolyásolja a sejtek növekedését, a hőmérsékleti változások befolyásolják a tápközeg pH -ját is, mivel a CO2 oldhatósága megváltoztatja a pH -t (a pH -t alacsonyabb hőmérsékleten növekszik). A tenyésztett emlős sejtek elviselik a szignifikáns hőmérséklet csökkenését. Tárolhatók 4 ° C -on több napig, és elviselhetik a fagyasztást -196 ° C -ra (megfelelő feltételekkel). Ugyanakkor nem tolerálják a hőmérsékletet körülbelül 2 ° C felett a normál felett, több mint néhány órán keresztül, és gyorsan meghalnak 40 ° C -on. Az eredmények maximális reprodukálhatóságának biztosítása érdekében, még akkor is, ha a sejtek túlélnek, gondoskodni kell a hőmérsékletnek a lehető legkonzabb fenntartása érdekében az inkubátoron kívüli sejtek inkubálása és kezelése során.
Az inkubátoron belüli hőmérsékleti változások okai
Észrevette, hogy amikor az inkubátor ajtaját kinyitják, a hőmérséklet gyorsan 37 ° C -ra csökken. Általában a hőmérséklet néhány percen belül helyreáll az ajtó bezárása után. Valójában a statikus kultúráknak időre van szükségük az inkubátor beállított hőmérsékletének helyreállításához. Számos tényező befolyásolhatja azt az időt, amelyet a sejttenyészetnek az inkubátoron kívüli kezelés utáni hőmérséklet visszanyerése szükséges. Ezek a tényezők között szerepel: ：
- ▶ A sejtek időtartama nem volt az inkubátorból
- ▶ Az a lombik típusa, amelyben a sejtek termesztik (a geometria befolyásolja a hőátadást)
- ▶ Az inkubátorban lévő konténerek száma.
- ▶ A lombikok közvetlen érintkezése az acélpolckal befolyásolja a hőcserét és az optimális hőmérséklet elérésének sebességét, ezért jobb, ha elkerüljük a lombik halmazát, és minden edényt elhelyezzenek
- ▶ közvetlenül az inkubátor polcán.
Bármely friss tartály és felhasznált táptalaj kezdeti hőmérséklete szintén befolyásolja azt az időt, amely a sejtek optimális állapotában van; Minél alacsonyabb a hőmérsékletük, annál hosszabb ideig tart.
Ha ezek a tényezők idővel megváltoznak, akkor növelik a kísérletek közötti variabilitást is. Minimalizálni kell ezeket a hőmérsékleti ingadozásokat, még akkor is, ha nem mindig lehetséges mindent ellenőrizni (különösen, ha több ember ugyanazt az inkubátort használja).
Hogyan lehet minimalizálni a hőmérséklet -variációkat és csökkenteni a hőmérsékleti helyreállítási időt
A közeg előmelegítésével
Egyes kutatók hozzászoktak, hogy teljes palack táptalajt melegítsenek egy 37 ° C-os vízfürdőben, hogy felhasználás előtt erre a hőmérsékletre kerüljenek. A közeg előmelegítését egy olyan inkubátorban is lehet elősegíteni, amelyet csak közepes előmelegítéshez használnak, és nem a sejttenyésztéshez, ahol a közeg egy másik inkubátorban a sejttenyészetek megzavarása nélkül elérheti az optimális hőmérsékletet. De ez, amennyire tudjuk, általában nem megfizethető költség.
Az inkubátor belsejében
Nyissa ki az inkubátor ajtaját a lehető legkevésbé, és zárja be a lehető leggyorsabban. Kerülje a hideg foltokat, amelyek hőmérsékleti különbségeket hoznak létre az inkubátorban. Hagyjon helyet a lombikok között, hogy a levegő keringhessen. Az inkubátoron belüli polcok perforáltak. Ez lehetővé teszi a jobb hőelosztást, mivel lehetővé teszi a levegő áthaladását a lyukakon. A lyukak jelenléte azonban a sejtnövekedés különbségeihez vezethet, mivel a lyukak és a meta terület közötti hőmérsékleti különbség van. Ezen okok miatt, ha a kísérletei a sejttenyészet erősen egységes növekedését igénylik, akkor a tenyésztési lombikokat kisebb érintkezési felületekkel rendelkező fémtámaszokra helyezheti, amelyek általában nem szükségesek a rutin sejttenyészetben.
A sejtfeldolgozási idő minimalizálása
A sejtkezelési folyamat során az időköltség minimalizálása érdekében szükség van
- ▶ A munka megkezdése előtt szervezze meg az összes szükséges anyagot és eszközt.
- ▶ Gyorsan és simán dolgozzon, a kísérleti módszereket előre felülvizsgálja, hogy a műveletek ismétlődővé és automatizáltá váljanak.
- ▶ Minimalizálja a folyadékok érintkezését a környezeti levegővel.
- ▶ Tartson állandó hőmérsékletet a sejttenyésztő laboratóriumban, ahol dolgozik.
A postai idő: január-03-2024