Ջերմաստիճանի տատանումների ազդեցությունը բջջային կուլտուրայի վրա
Ջերմաստիճանը բջջային կուլտուրայի կարևոր պարամետր է, քանի որ այն ազդում է արդյունքների վերարտադրելիության վրա: 37°C-ից բարձր կամ ցածր ջերմաստիճանի փոփոխությունները շատ զգալի ազդեցություն ունեն կաթնասունների բջիջների աճի կինետիկայի վրա, նման բակտերիալ բջիջների ջերմաստիճանի փոփոխություններին: Գեների արտահայտման փոփոխությունները և բջջային կառուցվածքի, բջջային ցիկլի առաջընթացի, mRNA կայունության փոփոխությունները կարող են հայտնաբերվել կաթնասունների բջիջներում 32ºC ջերմաստիճանում մեկ ժամ անց: Բջջային աճի վրա անմիջական ազդեցությունից բացի, ջերմաստիճանի փոփոխությունները ազդում են նաև միջավայրի pH-ի վրա, քանի որ CO2-ի լուծելիությունը փոխում է pH-ը (pH-ը մեծանում է ցածր ջերմաստիճաններում): Կուլտուրացված կաթնասունների բջիջները կարող են դիմանալ ջերմաստիճանի զգալի անկումների: Դրանք կարող են պահվել 4°C ջերմաստիճանում մի քանի օր և կարող են դիմանալ սառեցմանը մինչև -196°C (համապատասխան պայմաններ օգտագործելով): Այնուամենայնիվ, դրանք չեն կարող դիմանալ նորմայից մոտ 2°C-ից բարձր ջերմաստիճաններին մի քանի ժամից ավելի և արագ կմահանան 40°C և ավելի բարձր ջերմաստիճանում: Արդյունքների առավելագույն վերարտադրելիությունն ապահովելու համար, նույնիսկ եթե բջիջները գոյատևեն, անհրաժեշտ է զգույշ լինել, որ ջերմաստիճանը հնարավորինս հաստատուն պահպանվի ինկուբացիայի և բջիջների ինկուբատորից դուրս մշակման ընթացքում:
Ինկուբատորում ջերմաստիճանի տատանումների պատճառները
Դուք նկատած կլինեք, որ երբ ինկուբատորի դուռը բացվում է, ջերմաստիճանը արագորեն իջնում է մինչև սահմանված 37°C արժեքը։ Ընդհանուր առմամբ, ջերմաստիճանը կվերականգնվի դռան փակվելուց հետո մի քանի րոպեի ընթացքում։ Փաստորեն, ստատիկ կուլտուրաներին ժամանակ է պետք ինկուբատորում սահմանված ջերմաստիճանին վերականգնվելու համար։ Ինկուբատորից դուրս մշակումից հետո բջջային կուլտուրայի ջերմաստիճանը վերականգնելու համար անհրաժեշտ ժամանակի վրա կարող են ազդել մի շարք գործոններ։ Այդ գործոններն են՝
- ▶ բջիջների ինկուբատորից դուրս գտնվելու ժամանակահատվածը
- ▶ բջիջների աճեցման համար նախատեսված կոլբայի տեսակը (երկրաչափությունը ազդում է ջերմափոխանակման վրա)
- ▶ Ինկուբատորում տարաների քանակը։
- ▶ Սալոնների պողպատե դարակի հետ անմիջական շփումը ազդում է ջերմափոխանակման և օպտիմալ ջերմաստիճանի հասնելու արագության վրա, ուստի ավելի լավ է խուսափել սալոնների կույտերից և յուրաքանչյուր անոթը տեղադրել
- ▶ անմիջապես ինկուբատորի դարակի վրա։
Օգտագործված ցանկացած թարմ տարայի և միջավայրի սկզբնական ջերմաստիճանը նույնպես կազդի բջիջների օպտիմալ վիճակին հասնելու համար անհրաժեշտ ժամանակի վրա. որքան ցածր է դրանց ջերմաստիճանը, այնքան ավելի երկար է դա տևում։
Եթե այս բոլոր գործոնները ժամանակի ընթացքում փոխվեն, դրանք նաև կմեծացնեն փորձերի միջև փոփոխականությունը։ Անհրաժեշտ է նվազագույնի հասցնել այս ջերմաստիճանի տատանումները, նույնիսկ եթե միշտ չէ, որ հնարավոր է ամեն ինչ վերահսկել (հատկապես, եթե նույն ինկուբատորն օգտագործում են մի քանի մարդիկ)։
Ինչպես նվազագույնի հասցնել ջերմաստիճանի տատանումները և կրճատել ջերմաստիճանի վերականգնման ժամանակը
Միջավայրը նախապես տաքացնելով
Որոշ հետազոտողներ սովոր են օգտագործելուց առաջ միջավայրի ամբողջական շշերը նախապես տաքացնել 37°C ջրային լոգարանում՝ դրանք այս ջերմաստիճանին հասցնելու համար: Հնարավոր է նաև միջավայրը նախապես տաքացնել ինկուբատորում, որն օգտագործվում է միայն միջավայրի նախնական տաքացման համար, այլ ոչ թե բջջային կուլտուրայի համար, որտեղ միջավայրը կարող է հասնել օպտիմալ ջերմաստիճանի՝ առանց մեկ այլ ինկուբատորում բջջային կուլտուրաները խանգարելու: Սակայն, որքանով մենք գիտենք, սա սովորաբար մատչելի ծախս չէ:
Ինկուբատորի ներսում
Հնարավորինս քիչ բացեք ինկուբատորի դուռը և հնարավորինս արագ փակեք այն։ Խուսափեք սառը կետերից, որոնք ինկուբատորում ջերմաստիճանային տարբերություններ են ստեղծում։ Թողեք տարածություն սրվակների միջև՝ օդը շրջանառելու համար։ Ինկուբատորի ներսում գտնվող դարակները կարող են անցքավորվել։ Սա թույլ է տալիս ավելի լավ բաշխել ջերմությունը, քանի որ թույլ է տալիս օդին անցնել անցքերից։ Այնուամենայնիվ, անցքերի առկայությունը կարող է հանգեցնել բջիջների աճի տարբերությունների, քանի որ ջերմաստիճանային տարբերություն կա անցքերով և մետա-բջիջներով տարածքների միջև։ Այս պատճառներով, եթե ձեր փորձերը պահանջում են բջջային կուլտուրայի խիստ միատարր աճ, կարող եք կուլտուրայի սրվակները տեղադրել մետաղական հենարանների վրա՝ ավելի փոքր շփման մակերեսներով, որոնք սովորաբար անհրաժեշտ չեն բջջային կուլտուրայի սովորական պայմաններում։
Բջջային մշակման ժամանակի նվազագույնի հասցնելը
Բջջային մշակման գործընթացին ծախսվող ժամանակը նվազագույնի հասցնելու համար անհրաժեշտ է.
- ▶ Աշխատանքը սկսելուց առաջ դասավորեք բոլոր անհրաժեշտ նյութերն ու գործիքները։
- ▶ Աշխատեք արագ և սահուն՝ նախապես վերանայելով փորձարարական մեթոդները, որպեսզի ձեր գործողությունները դառնան կրկնվող և ավտոմատացված։
- ▶ Նվազագույնի հասցրեք հեղուկների շփումը շրջակա օդի հետ։
- ▶ Պահպանեք հաստատուն ջերմաստիճան բջջային կուլտուրայի լաբորատորիայում, որտեղ աշխատում եք։
Հրապարակման ժամանակը. Հունվար-03-2024