השפעת שינויי הטמפרטורה על תרבית תאים
טמפרטורה היא פרמטר חשוב בתרבית תאים משום שהיא משפיעה על שחזור התוצאות. שינויי טמפרטורה מעל או מתחת ל-37 מעלות צלזיוס משפיעים באופן משמעותי מאוד על קינטיקה של גדילת תאים בתאי יונקים, בדומה לזו של תאי חיידקים. שינויים בביטוי גנים ושינויים במבנה התא, התקדמות מחזור התא ויציבות mRNA ניתנים לזיהוי בתאי יונקים לאחר שעה ב-32 מעלות צלזיוס. בנוסף להשפעה הישירה על גדילת התאים, שינויים בטמפרטורה משפיעים גם על רמת החומציות (pH) של המדיום, שכן מסיסות ה-CO2 משנה את ה-pH (pH עולה בטמפרטורות נמוכות יותר). תאי יונקים בתרבית יכולים לסבול ירידות משמעותיות בטמפרטורה. ניתן לאחסן אותם ב-4 מעלות צלזיוס למשך מספר ימים ויכולים לסבול קיפאון ל-196 מעלות צלזיוס- (תוך שימוש בתנאים מתאימים). עם זאת, הם אינם יכולים לסבול טמפרטורות מעל כ-2 מעלות צלזיוס מעל הרגיל למשך יותר מכמה שעות וימותו במהירות ב-40 מעלות צלזיוס ומעלה. כדי להבטיח שחזור מקסימלי של התוצאות, גם אם התאים שורדים, יש לנקוט משנה זהירות כדי לשמור על טמפרטורה קבועה ככל האפשר במהלך הדגירה והטיפול בתאים מחוץ לאינקובטור.
סיבות לשינויי טמפרטורה בתוך האינקובטור
בוודאי שמתם לב שכאשר דלת האינקובטור נפתחת, הטמפרטורה יורדת במהירות לערך שנקבע של 37 מעלות צלזיוס. באופן כללי, הטמפרטורה תחזור לעצמה תוך מספר דקות לאחר סגירת הדלת. למעשה, תרביות סטטיות זקוקות לזמן כדי לחזור לטמפרטורה שנקבעה באינקובטור. מספר גורמים יכולים להשפיע על הזמן שלוקח לתרבית תאים לחזור לטמפרטורה שלה לאחר טיפול מחוץ לאינקובטור. גורמים אלה כוללים:
- ▶ משך הזמן בו התאים היו מחוץ לחממה
- ▶סוג הבקבוק שבו גדלים התאים (הגיאומטריה משפיעה על העברת החום)
- ▶מספר המיכלים באינקובטור.
- ▶מגע ישיר של הבקבוקים עם מדף הפלדה משפיע על חילופי החום ועל מהירות ההגעה לטמפרטורה האופטימלית, לכן עדיף להימנע מערימות של בקבוקים ולהניח כל כלי
- ▶ישירות על מדף האינקובטור.
הטמפרטורה ההתחלתית של כל מיכל ומדיה טריים שבהם נעשה שימוש תשפיע גם על הזמן שלוקח לתאים להגיע למצבם האופטימלי; ככל שהטמפרטורה שלהם נמוכה יותר, כך זה לוקח יותר זמן.
אם כל הגורמים הללו משתנים לאורך זמן, הם גם יגדילו את השונות בין ניסויים. יש צורך למזער את תנודות הטמפרטורה הללו, גם אם לא תמיד ניתן לשלוט על הכל (במיוחד אם מספר אנשים משתמשים באותו אינקובטור).
כיצד למזער את שינויי הטמפרטורה ולקצר את זמן התאוששות הטמפרטורה
על ידי חימום מוקדם של המדיום
ישנם חוקרים המורגלים לחמם מראש בקבוקים שלמים של מצע באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס כדי להביא אותם לטמפרטורה זו לפני השימוש. ניתן גם לחמם מראש את המצע באינקובטור המשמש רק לחימום מוקדם של המצע ולא לתרבית תאים, שם המצע יכול להגיע לטמפרטורה אופטימלית מבלי להפריע לתרביות התאים באינקובטור אחר. אך, ככל הידוע לנו, זו בדרך כלל לא הוצאה משתלמת.
בתוך החממה
פתחו את דלת האינקובטור כמה שפחות וסגרו אותה מהר ככל האפשר. הימנעו מנקודות קור, היוצרות הבדלי טמפרטורה באינקובטור. השאירו מרווח בין הצלוחיות כדי לאפשר לאוויר לזרום. ניתן לנקב את המדפים בתוך האינקובטור. זה מאפשר פיזור חום טוב יותר מכיוון שהוא מאפשר לאוויר לעבור דרך החורים. עם זאת, נוכחותם של חורים יכולה להוביל להבדלים בגדילת התאים, מכיוון שיש הפרש טמפרטורה בין האזור עם החורים לאזור עם המטא. מסיבות אלה, אם הניסויים שלכם דורשים גידול אחיד ביותר של תרבית התאים, תוכלו להניח את צלוחיות התרבית על תומכי מתכת עם משטחי מגע קטנים יותר, שבדרך כלל אינם נחוצים בתרבית תאים שגרתית.
מזעור זמן עיבוד התא
כדי למזער את הזמן המושקע בתהליך טיפול בתאים, עליך
- ▶ארגנו את כל החומרים והכלים הדרושים לפני תחילת העבודה.
- ▶ עבדו במהירות ובחלקות, תוך סקירת שיטות ניסיוניות מראש כך שהפעולות שלכם יהפכו לחוזרות על עצמן ואוטומטיות.
- ▶ מזער את מגע הנוזלים עם אוויר הסביבה.
- ▶ שמרו על טמפרטורה קבועה במעבדת תרבית התאים בה אתם עובדים.
זמן פרסום: ינואר-03-2024