Temperatūras svārstību ietekme uz šūnu kultūru
Temperatūra ir svarīgs parametrs šūnu kultūrā, jo tā ietekmē rezultātu reproducējamību. Temperatūras izmaiņām virs vai zem 37°C ir ļoti būtiska ietekme uz zīdītāju šūnu augšanas kinētiku, līdzīgi kā baktēriju šūnām. Zīdītāju šūnās pēc vienas stundas 32°C temperatūrā var noteikt izmaiņas gēnu ekspresijā un modifikācijas šūnu struktūrā, šūnu cikla progresēšanā, mRNS stabilitātē. Papildus tiešai ietekmei uz šūnu augšanu, temperatūras izmaiņas ietekmē arī barotnes pH, jo CO2 šķīdība maina pH (pH palielinās zemākā temperatūrā). Kultivētas zīdītāju šūnas var paciest ievērojamu temperatūras pazemināšanos. Tās var uzglabāt 4°C temperatūrā vairākas dienas un var paciest sasaldēšanu līdz -196°C (izmantojot atbilstošus apstākļus). Tomēr tās nevar paciest temperatūru, kas ir augstāka par aptuveni 2°C virs normas, ilgāk par dažām stundām un ātri iet bojā 40°C un augstākā temperatūrā. Lai nodrošinātu maksimālu rezultātu reproducējamību, pat ja šūnas izdzīvo, inkubācijas laikā un šūnu apstrādes laikā ārpus inkubatora ir jāuzmanās, lai temperatūra tiktu uzturēta pēc iespējas nemainīgāka.
Temperatūras svārstību iemesli inkubatorā
Jūs droši vien esat pamanījuši, ka, atverot inkubatora durvis, temperatūra strauji pazeminās līdz iestatītajai vērtībai 37 °C. Parasti temperatūra atjaunojas dažu minūšu laikā pēc durvju aizvēršanas. Faktiski statiskajām kultūrām ir nepieciešams laiks, lai atjaunotos līdz iestatītajai temperatūrai inkubatorā. Laiku, kas nepieciešams šūnu kultūras temperatūras atgūšanai pēc apstrādes ārpus inkubatora, var ietekmēt vairāki faktori. Šie faktori ietver:
- ▶laiks, cik ilgi šūnas ir bijušas ārpus inkubatora
- ▶kolbas veids, kurā audzē šūnas (ģeometrija ietekmē siltuma pārnesi)
- ▶Konteineru skaits inkubatorā.
- ▶ Kolbu tieša saskare ar tērauda plauktu ietekmē siltumapmaiņu un optimālās temperatūras sasniegšanas ātrumu, tāpēc labāk izvairīties no kolbu kaudzēm un novietot katru trauku
- ▶tieši uz inkubatora plaukta.
Jebkura svaiga konteinera un izmantotās barotnes sākotnējā temperatūra ietekmēs arī laiku, kas nepieciešams, lai šūnas sasniegtu optimālo stāvokli; jo zemāka to temperatūra, jo ilgāks laiks nepieciešams.
Ja visi šie faktori laika gaitā mainās, tie palielinās arī mainīgumu starp eksperimentiem. Ir nepieciešams samazināt šīs temperatūras svārstības, pat ja ne vienmēr ir iespējams visu kontrolēt (īpaši, ja vairāki cilvēki izmanto vienu un to pašu inkubatoru).
Kā samazināt temperatūras svārstības un saīsināt temperatūras atjaunošanās laiku
Uzsildot barotni
Daži pētnieki ir pieraduši pirms lietošanas iepriekš uzsildīt veselas barotnes pudeles 37 °C ūdens vannā, lai tās sasniegtu šo temperatūru. Barotni var iepriekš uzsildīt arī inkubatorā, kas tiek izmantots tikai barotnes uzsildīšanai, nevis šūnu kultūrai, kur barotne var sasniegt optimālu temperatūru, netraucējot šūnu kultūras citā inkubatorā. Taču, cik mums zināms, tas parasti nav pieņemams izdevums.
Inkubatora iekšpusē
Inkubatora durvis atveriet pēc iespējas retāk un aizveriet tās pēc iespējas ātrāk. Izvairieties no aukstuma punktiem, kas inkubatorā rada temperatūras atšķirības. Starp kolbām atstājiet atstarpi, lai gaiss varētu cirkulēt. Inkubatora iekšpusē esošos plauktus var perforēt. Tas nodrošina labāku siltuma sadali, jo ļauj gaisam izplūst cauri caurumiem. Tomēr caurumu klātbūtne var izraisīt šūnu augšanas atšķirības, jo pastāv temperatūras atšķirība starp zonu ar caurumiem un zonu ar metamorfozēm. Šo iemeslu dēļ, ja jūsu eksperimentiem ir nepieciešama ļoti vienmērīga šūnu kultūras augšana, varat novietot kultūras kolbas uz metāla balstiem ar mazākām saskares virsmām, kas parasti nav nepieciešami ikdienas šūnu kultūrā.
Šūnu apstrādes laika samazināšana līdz minimumam
Lai samazinātu šūnu apstrādes procesā pavadīto laiku, jums ir nepieciešams
- ▶Pirms darba uzsākšanas sakārtojiet visus nepieciešamos materiālus un instrumentus.
- ▶Strādājiet ātri un vienmērīgi, iepriekš pārskatot eksperimentālās metodes, lai jūsu darbības kļūtu atkārtotas un automatizētas.
- ▶Samaziniet šķidrumu saskari ar apkārtējo gaisu.
- ▶Šūnu kultūru laboratorijā, kurā strādājat, uzturiet nemainīgu temperatūru.
Publicēšanas laiks: 2024. gada 3. janvāris