Ефект на варијацијата на температурата врз клеточната култура
Температурата е важен параметар во клеточната култура бидејќи влијае на репродуктивноста на резултатите. Промените на температурата над или под 37°C имаат многу значаен ефект врз кинетиката на раст на клетките кај цицачите, слично на онаа кај бактериските клетки. Промените во генската експресија и модификациите во клеточната структура, прогресијата на клеточниот циклус, стабилноста на mRNA може да се детектираат во клетките кај цицачите по еден час на 32ºC. Покрај директното влијание врз растот на клетките, промените во температурата влијаат и на pH вредноста на медиумот, бидејќи растворливоста на CO2 ја менува pH вредноста (pH се зголемува на пониски температури). Култивираните клетки кај цицачите можат да толерираат значително намалување на температурата. Тие можат да се чуваат на 4 °C неколку дена и можат да толерираат замрзнување до -196 °C (користејќи соодветни услови). Сепак, тие не можат да толерираат температури над околу 2 °C над нормалата повеќе од неколку часа и брзо ќе умрат на 40 °C и погоре. За да се обезбеди максимална репродуктивност на резултатите, дури и ако клетките преживеат, треба да се внимава температурата да се одржува што е можно поконстантна за време на инкубацијата и ракувањето со клетките надвор од инкубаторот.
Причини за температурни промени во инкубаторот
Ќе забележите дека кога ќе се отвори вратата на инкубаторот, температурата брзо паѓа до зададената вредност од 37 °C. Општо земено, температурата ќе се врати во рок од неколку минути откако ќе се затвори вратата. Всушност, на статичните култури им е потребно време за да се вратат на зададената температура во инкубаторот. Голем број фактори можат да влијаат на времето потребно за клеточната култура да ја врати температурата по третманот надвор од инкубаторот. Овие фактори вклучуваат:
- ▶ временскиот период во кој клетките биле надвор од инкубаторот
- ▶ типот на колба во која се одгледуваат клетките (геометријата влијае на преносот на топлина)
- ▶ Број на контејнери во инкубаторот.
- ▶ Директниот контакт на боците со челичната полица влијае на размената на топлина и брзината на постигнување на оптималната температура, па затоа е подобро да се избегнуваат купови боци и секој сад да се поставува
- ▶директно на полицата од инкубаторот.
Почетната температура на сите свежи контејнери и медиуми што се користат, исто така, ќе влијае на времето потребно клетките да ја достигнат својата оптимална состојба; колку е пониска нивната температура, толку подолго време е потребно.
Доколку сите овие фактори се променат со текот на времето, тие исто така ќе ја зголемат варијабилноста помеѓу експериментите. Потребно е да се минимизираат овие температурни флуктуации, дури и ако не е секогаш можно да се контролира сè (особено ако неколку луѓе го користат истиот инкубатор).
Како да се минимизираат температурните варијации и да се намали времето за обновување на температурата
Со претходно загревање на медиумот
Некои истражувачи се навикнати претходно да ги загреваат целите шишиња со медиум во водена бања од 37 °C за да ја достигнат оваа температура пред употреба. Исто така е можно медиумот претходно да се загрее во инкубатор кој се користи само за претходно загревање на медиумот, а не за клеточна култура, каде што медиумот може да достигне оптимална температура без да ги наруши клеточните култури во друг инкубатор. Но, ова, доколку ни е познато, обично не е прифатлив трошок.
Внатре во инкубаторот
Отворајте ја вратата од инкубаторот што е можно помалку и затворете ја што е можно побрзо. Избегнувајте ладни точки, кои создаваат температурни разлики во инкубаторот. Оставете простор помеѓу колбите за да може воздухот да циркулира. Полиците во инкубаторот може да бидат перфорирани. Ова овозможува подобра распределба на топлината бидејќи дозволува воздухот да поминува низ дупките. Сепак, присуството на дупки може да доведе до разлики во растот на клетките, бидејќи постои температурна разлика помеѓу областа со дупки и областа со мета. Од овие причини, ако вашите експерименти бараат многу униформен раст на клеточната култура, можете да ги поставите колбите за култура на метални носачи со помали контактни површини, што обично не се неопходни во рутинската клеточна култура.
Минимизирање на времето за обработка на клетките
За да го минимизирате времето поминато во процесот на третман на клетки, потребно е да
- ▶ Организирајте ги сите потребни материјали и алатки пред да започнете со работа.
- ▶ Работете брзо и непречено, однапред прегледувајќи ги експерименталните методи за да вашите операции станат повторувачки и автоматизирани.
- ▶ Намалете го контактот на течностите со амбиентниот воздух.
- ▶ Одржувајте константна температура во лабораторијата за клеточни култури каде што работите.
Време на објавување: 03 јануари 2024 година