Kesan variasi suhu pada kultur sel
Suhu adalah parameter penting dalam kultur sel kerana ia mempengaruhi kebolehulangan hasil. Perubahan suhu di atas atau di bawah 37°C mempunyai kesan yang sangat ketara ke atas kinetik pertumbuhan sel sel mamalia, sama seperti sel bakteria. Perubahan dalam ekspresi gen dan pengubahsuaian dalam struktur selular, perkembangan kitaran sel, kestabilan mRNA boleh dikesan dalam sel mamalia selepas satu jam pada 32ºC. Selain mempengaruhi pertumbuhan sel secara langsung, perubahan suhu juga mempengaruhi pH media, kerana keterlarutan CO2 mengubah pH (pH meningkat pada suhu yang lebih rendah). Sel mamalia yang dikultur boleh bertolak ansur dengan penurunan suhu yang ketara. Ia boleh disimpan pada suhu 4 °C selama beberapa hari dan boleh bertolak ansur dengan pembekuan hingga -196 °C (menggunakan keadaan yang sesuai). Walau bagaimanapun, mereka tidak boleh bertolak ansur dengan suhu di atas kira-kira 2 °C di atas normal selama lebih daripada beberapa jam dan akan mati dengan cepat pada 40 °C dan ke atas. Untuk memastikan kebolehulangan maksimum hasil, walaupun sel bertahan, penjagaan perlu diambil untuk mengekalkan suhu semalar mungkin semasa pengeraman dan pengendalian sel di luar inkubator.
Sebab perubahan suhu di dalam inkubator
Anda akan perasan bahawa apabila pintu inkubator dibuka, suhu turun dengan cepat kepada nilai yang ditetapkan iaitu 37 °C. Secara umum, suhu akan pulih dalam masa beberapa minit selepas pintu ditutup. Malah, kultur statik memerlukan masa untuk pulih kepada suhu yang ditetapkan dalam inkubator. Beberapa faktor boleh mempengaruhi masa yang diambil untuk kultur sel untuk mendapatkan semula suhu selepas rawatan di luar inkubator. Faktor-faktor ini termasuk:
- ▶tempoh masa sel telah keluar dari inkubator
- ▶jenis kelalang di mana sel tumbuh (geometri mempengaruhi pemindahan haba)
- ▶Bilangan bekas dalam inkubator .
- ▶ Sentuhan langsung kelalang dengan rak keluli menjejaskan pertukaran haba dan kelajuan mencapai suhu optimum, jadi adalah lebih baik untuk mengelakkan timbunan kelalang dan meletakkan setiap bekas
- ▶terus pada rak inkubator.
Suhu awal mana-mana bekas dan media segar yang digunakan juga akan menjejaskan masa yang diambil untuk sel berada pada keadaan optimumnya; semakin rendah suhu mereka, semakin lama masa yang diperlukan.
Jika semua faktor ini berubah dari semasa ke semasa, ia juga akan meningkatkan kebolehubahan antara eksperimen. Ia adalah perlu untuk meminimumkan turun naik suhu ini, walaupun tidak selalu mungkin untuk mengawal segala-galanya (terutamanya jika beberapa orang menggunakan inkubator yang sama).
Bagaimana untuk meminimumkan variasi suhu dan mengurangkan masa pemulihan suhu
Dengan memanaskan medium
Sesetengah penyelidik terbiasa dengan pra-memanaskan seluruh botol media dalam tab mandi air 37 °C untuk membawanya ke suhu ini sebelum digunakan. Ia juga mungkin untuk memanaskan medium dalam inkubator yang hanya digunakan untuk pemanasan awal sederhana dan bukan untuk kultur sel, di mana medium boleh mencapai suhu optimum tanpa mengganggu kultur sel dalam inkubator lain. Tetapi ini, setakat yang kita tahu, biasanya bukan perbelanjaan yang berpatutan.
Di dalam Inkubator
Buka pintu inkubator sekecil mungkin dan tutupnya secepat mungkin. Elakkan bintik-bintik sejuk, yang mewujudkan perbezaan suhu dalam inkubator. Biarkan ruang di antara kelalang untuk membolehkan udara beredar. Rak di dalam inkubator boleh berlubang. Ini membolehkan pengagihan haba yang lebih baik kerana ia membolehkan udara melalui lubang. Walau bagaimanapun, kehadiran lubang boleh menyebabkan perbezaan dalam pertumbuhan sel, kerana terdapat perbezaan suhu antara kawasan berlubang dan kawasan bermeta. Atas sebab ini, jika eksperimen anda memerlukan pertumbuhan kultur sel yang sangat seragam, anda boleh meletakkan kelalang kultur pada penyokong logam dengan permukaan sentuhan yang lebih kecil, yang biasanya tidak diperlukan dalam kultur sel rutin.
Meminimumkan Masa Pemprosesan Sel
Untuk meminimumkan masa yang dihabiskan dalam proses rawatan sel, anda perlu
- ▶Atur semua bahan dan alatan yang diperlukan sebelum anda mula bekerja.
- ▶Bekerja dengan cepat dan lancar, semak kaedah percubaan terlebih dahulu supaya operasi anda menjadi berulang dan automatik.
- ▶Kurangkan sentuhan cecair dengan udara ambien.
- ▶Kekalkan suhu malar di makmal kultur sel tempat anda bekerja.
Masa siaran: Jan-03-2024