中文
Вплив коливання температури на клітинну культуру
Температура є важливим параметром у клітинній культурі, оскільки впливає на відтворюваність результатів. Зміни температури вище або нижче 37 ° C мають дуже значний вплив на кінетику росту клітин клітин ссавців, подібно до клітин бактерій. Зміни експресії генів та модифікаціях клітинної структури, прогресування клітинного циклу, стабільність мРНК можна виявити в клітинах ссавців через одну годину при 32 ° C. Окрім безпосередньо впливу на ріст клітин, зміни температури також впливають на рН середовища, оскільки розчинність СО2 змінює рН (pH збільшується при нижчих температурах). Культивовані клітини ссавців можуть терпіти значне зниження температури. Їх можна зберігати при 4 ° С протягом декількох днів і можуть терпіти замерзання до -196 ° C (використовуючи відповідні умови). Однак вони не можуть терпіти температури вище приблизно на 2 ° С вище нормальної протягом більше декількох годин і швидко загинуть при 40 ° С і вище. Для забезпечення максимальної відтворюваності результатів, навіть якщо клітини виживають, потрібно бути обережним, щоб підтримувати температуру максимально постійною під час інкубації та поводження з клітинами поза інкубатором.
Причини змін температури всередині інкубатора
Ви помітили, що коли двері інкубатора відкриваються, температура швидко падає до встановленого значення 37 ° C. Загалом, температура відновляться протягом декількох хвилин після зачини двері. Насправді статичні культури потребують часу, щоб відновити встановлену температуру в інкубаторі. Ряд факторів може впливати на час, необхідний для клітинної культури, щоб відновити температуру після лікування поза інкубатором. Ці фактори включають:
- ▶ Тривалість часу, коли клітини вийшли з інкубатора
- ▶ Тип колби, в якій вирощують клітини (геометрія впливає на теплопередачу)
- ▶ Кількість контейнерів в інкубаторі.
- I
- ▶ безпосередньо на полиці інкубатора.
Початкова температура будь -яких свіжих контейнерів та середовища, що використовуються, також вплине на час, необхідний для того, щоб клітини були в їх оптимальному стані; Чим нижча їх температура, тим довше це займає.
Якщо всі ці фактори змінюються з часом, вони також збільшать мінливість між експериментами. Необхідно мінімізувати ці коливання температури, навіть якщо не завжди можна контролювати все (особливо якщо кілька людей використовують один і той же інкубатор).
Як мінімізувати зміни температури та зменшити час відновлення температури
Шляхом попереднього нагрівання середовища
Деякі дослідники звикли заздалегідь гріть цілі пляшки середовища на водяній бані 37 ° C, щоб передати їх до цієї температури перед використанням. Можна також попередньо розігріти середовище в інкубаторі, який використовується лише для середовища попереднього нагрівання, а не для клітинної культури, де середовище може досягти оптимальної температури, не порушуючи клітинних культур в іншому інкубаторі. Але це, наскільки ми знаємо, зазвичай не є доступними витратами.
Всередині інкубатора
Відкрийте двері інкубатора якомога менше і закрийте їх якомога швидше. Уникайте холодних плям, які створюють температурні відмінності в інкубаторі. Залиште простір між колбами, щоб повітря дозволило циркулювати. Полиці всередині інкубатора можуть бути перфоровані. Це дозволяє покращити розподіл тепла, оскільки дозволяє повітря проходити через отвори. Однак наявність отворів може призвести до відмінностей у зростанні клітин, оскільки існує різниця температури між площею з отворами та площею з мета. З цих причин, якщо ваші експерименти потребують високоортильного зростання клітинної культури, ви можете розмістити колби культури на підставці для металів з меншими контактними поверхнями, які зазвичай не потрібні в звичайній клітинній культурі.
Мінімізація часу обробки клітин
Щоб мінімізувати витрати на процес лікування клітин, вам потрібно
- ▶ Організуйте всі необхідні матеріали та інструменти, перш ніж почати працювати.
- ▶ Працюйте швидко та плавно, заздалегідь переглядаючи експериментальні методи, щоб ваші операції стали повторювані та автоматизовані.
- ▶ Мінімізуйте контакт рідин з навколишнім повітрям.
- ▶ Підтримуйте постійну температуру в лабораторії клітинної культури, де ви працюєте.
Час посади: 03-2024 січня