中文
Ефект от изменението на температурата върху клетъчната култура
Температурата е важен параметър в клетъчната култура, тъй като влияе върху възпроизводимостта на резултатите. Температурните промени над или под 37 ° С оказват много значителен ефект върху кинетиката на растежа на клетките на клетките на бозайниците, подобно на тази на бактериалните клетки. Промени в генната експресия и модификации в клетъчната структура, прогресията на клетъчния цикъл, стабилността на мРНК могат да бъдат открити в клетките на бозайниците след един час при 32 ° С. В допълнение към пряко влиянието на растежа на клетките, промените в температурата влияят и на рН на средата, тъй като разтворимостта на CO2 променя рН (pH се увеличава при по -ниски температури). Култивираните клетки на бозайниците могат да понасят значително намаляване на температурата. Те могат да се съхраняват при 4 ° С в продължение на няколко дни и могат да понасят замръзване до -196 ° С (използвайки подходящи условия). Те обаче не могат да понасят температури над около 2 ° C над нормалното за повече от няколко часа и ще умрат бързо при 40 ° C и повече. За да се осигури максимална възпроизводимост на резултатите, дори ако клетките оцелеят, трябва да се внимава, за да се поддържа температурата възможно най -постоянна по време на инкубацията и обработката на клетките извън инкубатора.
Причини за изменение на температурата вътре в инкубатора
Ще забележите, че когато се отвори вратата на инкубатора, температурата пада бързо до зададената стойност от 37 ° C. Като цяло температурата ще се възстанови в рамките на няколко минути след затварянето на вратата. Всъщност статичните култури се нуждаят от време, за да се възстановят до зададената температура в инкубатора. Редица фактори могат да повлияят на времето, необходимо на клетъчната култура да възвърне температурата след лечение извън инкубатора. Тези фактори включват ： ：
- ▶ Продължителността на времето, когато клетките са били извън инкубатора
- ▶ Видът на колбата, в който се отглежда клетки (геометрията влияе на топлопредаването)
- ▶ Брой контейнери в инкубатора.
- ▶ Директен контакт на колбите със стоманен рафт влияе върху топлообменния и скоростта на достигане на оптималната температура, така че е по -добре да избягвате купчините колби и да поставите всеки съд
- ▶ директно на рафта на инкубатора.
Първоначалната температура на всякакви свежи контейнери и използвани среди също ще повлияе на времето, необходимо за клетките да бъдат в оптималното им състояние; Колкото по -ниска е температурата им, толкова по -дълго отнема.
Ако всички тези фактори се променят с течение на времето, те също ще увеличат променливостта между експериментите. Необходимо е да се сведат до минимум тези температурни колебания, дори ако не винаги е възможно да се контролира всичко (особено ако няколко души използват един и същ инкубатор).
Как да сведете до минимум измененията на температурата и да намалите времето за възстановяване на температурата
Чрез предварително загряване на средата
Някои изследователи са свикнали да затопват цели бутилки от медия във водна баня с 37 ° C, за да ги приведат до тази температура преди употреба. Възможно е също така да се загрее средата в инкубатор, който се използва само за средно загряване, а не за клетъчна култура, където средата може да достигне оптимална температура, без да нарушава клетъчните култури в друг инкубатор. Но това, доколкото знаем, обикновено не е достъпно разход.
Вътре в инкубатора
Отворете вратата на инкубатора възможно най -малко и я затворете възможно най -бързо. Избягвайте студените петна, които създават температурни разлики в инкубатора. Оставете място между колбите, за да може въздухът да циркулира. Рафтовете вътре в инкубатора могат да бъдат перфорирани. Това позволява по -добро разпределение на топлина, тъй като позволява въздухът да преминава през дупките. Наличието на дупки обаче може да доведе до разлики в растежа на клетките, тъй като има разлика в температурата между зоната с дупки и зоната с мета. Поради тези причини, ако вашите експерименти изискват силно равномерен растеж на клетъчната култура, можете да поставите културните колби върху метални опори с по -малки контактни повърхности, които обикновено не са необходими в рутинната клетъчна култура.
Минимизиране на времето за обработка на клетките
За да сведете до минимум разходите за време в процеса на лечение на клетки, трябва да
- ▶ Организирайте всички необходими материали и инструменти, преди да започнете да работите.
- ▶ Работете бързо и гладко, като прегледате предварително експериментални методи, така че вашите операции да станат повтарящи се и автоматизирани.
- ▶ Минимизирайте контакта на течности с околен въздух.
- ▶ Поддържайте постоянна температура в лабораторията за клетъчна култура, където работите.
Време за публикация: януари-03-2024