تأثیر تغییرات دما بر کشت سلولی
دما یک پارامتر مهم در کشت سلولی است زیرا بر تکرارپذیری نتایج تأثیر می‌گذارد. تغییرات دما بالاتر یا پایین‌تر از ۳۷ درجه سانتیگراد تأثیر بسیار قابل توجهی بر سینتیک رشد سلولی سلول‌های پستانداران، مشابه سلول‌های باکتریایی، دارد. تغییرات در بیان ژن و تغییرات در ساختار سلولی، پیشرفت چرخه سلولی، پایداری mRNA را می‌توان در سلول‌های پستانداران پس از یک ساعت در دمای ۳۲ درجه سانتیگراد تشخیص داد. تغییرات دما علاوه بر تأثیر مستقیم بر رشد سلول، بر pH محیط کشت نیز تأثیر می‌گذارد، زیرا حلالیت CO2 pH را تغییر می‌دهد (pH در دماهای پایین‌تر افزایش می‌یابد). سلول‌های کشت شده پستانداران می‌توانند کاهش قابل توجه دما را تحمل کنند. آنها را می‌توان برای چند روز در دمای ۴ درجه سانتیگراد نگهداری کرد و می‌توانند انجماد تا -۱۹۶ درجه سانتیگراد را (با استفاده از شرایط مناسب) تحمل کنند. با این حال، آنها نمی‌توانند دمای بالاتر از حدود ۲ درجه سانتیگراد بالاتر از حد طبیعی را بیش از چند ساعت تحمل کنند و در دمای ۴۰ درجه سانتیگراد و بالاتر به سرعت می‌میرند. برای اطمینان از حداکثر تکرارپذیری نتایج، حتی اگر سلول‌ها زنده بمانند، باید دقت شود که دما در طول انکوباسیون و جابجایی سلول‌ها در خارج از انکوباتور تا حد امکان ثابت نگه داشته شود.
دلایل اختلاف دما در دستگاه جوجه کشی
حتماً متوجه شده‌اید که وقتی درب انکوباتور باز می‌شود، دما به سرعت به مقدار تعیین‌شده‌ی ۳۷ درجه‌ی سانتیگراد کاهش می‌یابد. به‌طورکلی، دما ظرف چند دقیقه پس از بسته شدن درب، به حالت اولیه برمی‌گردد. در واقع، کشت‌های ایستا برای بازیابی دمای تنظیم‌شده در انکوباتور به زمان نیاز دارند. عوامل متعددی می‌توانند بر مدت زمان لازم برای بازیابی دمای کشت سلولی پس از تیمار در خارج از انکوباتور تأثیر بگذارند. این عوامل عبارتند از:
- ▶مدت زمانی که سلول‌ها خارج از دستگاه انکوباتور بوده‌اند
- ▶ نوع فلاسکی که سلول‌ها در آن رشد می‌کنند (هندسه بر انتقال حرارت تأثیر می‌گذارد)
- ▶ تعداد ظروف موجود در دستگاه جوجه کشی.
- ▶ تماس مستقیم فلاسک‌ها با قفسه فولادی بر تبادل گرما و سرعت رسیدن به دمای مطلوب تأثیر می‌گذارد، بنابراین بهتر است از انباشته شدن فلاسک‌ها خودداری کنید و هر ظرف را روی قفسه‌ای جداگانه قرار دهید.
- ▶مستقیماً روی قفسه دستگاه جوجه‌کشی.
دمای اولیه هر ظرف و محیط کشت تازه مورد استفاده نیز بر مدت زمان لازم برای رسیدن سلول‌ها به حالت بهینه تأثیر می‌گذارد؛ هرچه دمای آنها پایین‌تر باشد، این زمان بیشتر طول می‌کشد.
اگر همه این عوامل در طول زمان تغییر کنند، باعث افزایش تنوع بین آزمایش‌ها نیز می‌شوند. لازم است این نوسانات دما به حداقل برسد، حتی اگر همیشه کنترل همه چیز ممکن نباشد (به خصوص اگر چندین نفر از یک انکوباتور استفاده می‌کنند).
چگونه تغییرات دما را به حداقل برسانیم و زمان بازیابی دما را کاهش دهیم
با پیش گرم کردن محیط کشت
برخی از محققان عادت دارند که بطری‌های کامل محیط کشت را قبل از استفاده در حمام آب ۳۷ درجه سانتیگراد گرم کنند تا به این دما برسند. همچنین می‌توان محیط کشت را در انکوباتوری که فقط برای پیش گرم کردن محیط کشت استفاده می‌شود و نه برای کشت سلولی، گرم کرد، جایی که محیط کشت می‌تواند بدون ایجاد اختلال در کشت‌های سلولی در انکوباتور دیگر به دمای مطلوب برسد. اما تا آنجا که ما می‌دانیم، این معمولاً هزینه مقرون به صرفه‌ای نیست.
داخل دستگاه جوجه کشی
درب انکوباتور را تا حد امکان کم باز و بسته کنید و هر چه سریعتر آن را ببندید. از ایجاد نقاط سرد که باعث ایجاد اختلاف دما در انکوباتور می‌شوند، خودداری کنید. بین فلاسک‌ها فاصله بگذارید تا هوا گردش کند. قفسه‌های داخل انکوباتور می‌توانند سوراخ‌دار باشند. این امر توزیع بهتر گرما را امکان‌پذیر می‌کند زیرا به هوا اجازه می‌دهد از سوراخ‌ها عبور کند. با این حال، وجود سوراخ‌ها می‌تواند منجر به تفاوت در رشد سلول شود، زیرا بین ناحیه دارای سوراخ و ناحیه دارای متا اختلاف دما وجود دارد. به همین دلایل، اگر آزمایش‌های شما نیاز به رشد بسیار یکنواخت کشت سلولی دارد، می‌توانید فلاسک‌های کشت را روی پایه‌های فلزی با سطوح تماس کوچکتر قرار دهید، که معمولاً در کشت سلولی معمول ضروری نیستند.
به حداقل رساندن زمان پردازش سلول
برای به حداقل رساندن زمان صرف شده در فرآیند درمان سلولی، باید
- ▶قبل از شروع کار، تمام مواد و ابزار لازم را سازماندهی کنید.
- ▶ سریع و روان کار کنید، روش‌های تجربی را از قبل مرور کنید تا عملیات شما تکراری و خودکار شود.
- ▶تماس مایعات با هوای محیط را به حداقل برسانید.
- ▶دمای ثابتی را در آزمایشگاه کشت سلولی که در آن کار می‌کنید، حفظ کنید.
زمان ارسال: ژانویه-03-2024