कोशिका संवर्धन पर तापमान परिवर्तन का प्रभाव
सेल कल्चर में तापमान एक महत्वपूर्ण पैरामीटर है क्योंकि यह परिणामों की पुनरुत्पादकता को प्रभावित करता है। 37 डिग्री सेल्सियस से ऊपर या नीचे के तापमान में परिवर्तन स्तनधारी कोशिकाओं की कोशिका वृद्धि गतिकी पर बहुत महत्वपूर्ण प्रभाव डालते हैं, जो कि जीवाणु कोशिकाओं के समान है। जीन अभिव्यक्ति में परिवर्तन और सेलुलर संरचना में संशोधन, सेल चक्र प्रगति, mRNA स्थिरता को 32 डिग्री सेल्सियस पर एक घंटे के बाद स्तनधारी कोशिकाओं में देखा जा सकता है। सेल वृद्धि को सीधे प्रभावित करने के अलावा, तापमान में परिवर्तन मीडिया के pH को भी प्रभावित करते हैं, क्योंकि CO2 की घुलनशीलता pH को बदल देती है (कम तापमान पर pH बढ़ जाता है)। संवर्धित स्तनधारी कोशिकाएँ महत्वपूर्ण तापमान में कमी को सहन कर सकती हैं। उन्हें कई दिनों तक 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है और -196 डिग्री सेल्सियस (उचित परिस्थितियों का उपयोग करके) तक ठंड को सहन कर सकते हैं। हालांकि, वे कुछ घंटों से अधिक समय तक सामान्य से लगभग 2 डिग्री सेल्सियस अधिक तापमान को सहन नहीं कर सकते हैं और 40 डिग्री सेल्सियस और उससे अधिक पर जल्दी मर जाएंगे। परिणामों की अधिकतम पुनरुत्पादकता सुनिश्चित करने के लिए, भले ही कोशिकाएं जीवित रहें, इनक्यूबेटर के बाहर कोशिकाओं के इनक्यूबेशन और हैंडलिंग के दौरान तापमान को यथासंभव स्थिर बनाए रखने के लिए सावधानी बरतने की आवश्यकता होती है।
इनक्यूबेटर के अंदर तापमान में बदलाव के कारण
आपने देखा होगा कि जब इनक्यूबेटर का दरवाज़ा खोला जाता है, तो तापमान तेज़ी से गिरकर 37 °C के निर्धारित मान पर आ जाता है। आम तौर पर, दरवाज़ा बंद होने के कुछ ही मिनटों के भीतर तापमान ठीक हो जाता है। वास्तव में, स्थिर संस्कृतियों को इनक्यूबेटर में निर्धारित तापमान पर वापस आने के लिए समय की आवश्यकता होती है। इनक्यूबेटर के बाहर उपचार के बाद सेल संस्कृति को तापमान वापस पाने में लगने वाले समय को कई कारक प्रभावित कर सकते हैं। इन कारकों में शामिल हैं:
- ▶कोशिकाओं को इनक्यूबेटर से बाहर रखे जाने का समय
- ▶फ्लास्क का प्रकार जिसमें कोशिकाएँ विकसित की जाती हैं (ज्यामिति ऊष्मा स्थानांतरण को प्रभावित करती है)
- ▶इनक्यूबेटर में कंटेनरों की संख्या.
- ▶स्टील शेल्फ के साथ फ्लास्क का सीधा संपर्क गर्मी विनिमय और इष्टतम तापमान तक पहुंचने की गति को प्रभावित करता है, इसलिए फ्लास्क के ढेर से बचना और प्रत्येक बर्तन को अलग-अलग स्थानों पर रखना बेहतर होता है।
- ▶सीधे इनक्यूबेटर के शेल्फ पर।
किसी भी नए कंटेनर और मीडिया का प्रारंभिक तापमान भी कोशिकाओं को उनकी इष्टतम स्थिति में आने में लगने वाले समय को प्रभावित करेगा; उनका तापमान जितना कम होगा, उतना ही अधिक समय लगेगा।
यदि ये सभी कारक समय के साथ बदलते हैं, तो वे प्रयोगों के बीच परिवर्तनशीलता को भी बढ़ाएँगे। इन तापमान में उतार-चढ़ाव को कम करना आवश्यक है, भले ही हर चीज को नियंत्रित करना हमेशा संभव न हो (खासकर यदि कई लोग एक ही इनक्यूबेटर का उपयोग कर रहे हों)।
तापमान भिन्नता को न्यूनतम कैसे करें और तापमान पुनर्प्राप्ति समय को कैसे कम करें
माध्यम को पहले से गरम करके
कुछ शोधकर्ता मीडिया की पूरी बोतलों को 37 डिग्री सेल्सियस के पानी के स्नान में गर्म करने के आदी हैं ताकि उन्हें उपयोग से पहले इस तापमान पर लाया जा सके। एक इनक्यूबेटर में माध्यम को पहले से गरम करना भी संभव है जिसका उपयोग केवल माध्यम को गर्म करने के लिए किया जाता है और सेल कल्चर के लिए नहीं, जहाँ माध्यम दूसरे इनक्यूबेटर में सेल कल्चर को परेशान किए बिना इष्टतम तापमान तक पहुँच सकता है। लेकिन यह, जहाँ तक हम जानते हैं, आमतौर पर एक किफायती खर्च नहीं है।
इनक्यूबेटर के अंदर
इनक्यूबेटर का दरवाज़ा जितना संभव हो उतना कम खोलें और इसे जल्दी से जल्दी बंद करें। ठंडे स्थानों से बचें, जो इनक्यूबेटर में तापमान में अंतर पैदा करते हैं। हवा को प्रसारित करने के लिए फ्लास्क के बीच जगह छोड़ें। इनक्यूबेटर के अंदर की अलमारियों को छिद्रित किया जा सकता है। यह बेहतर गर्मी वितरण की अनुमति देता है क्योंकि यह छिद्रों से हवा को गुजरने देता है। हालाँकि, छिद्रों की उपस्थिति से कोशिका वृद्धि में अंतर हो सकता है, क्योंकि छिद्रों वाले क्षेत्र और मेटा वाले क्षेत्र के बीच तापमान में अंतर होता है। इन कारणों से, यदि आपके प्रयोगों में सेल कल्चर की अत्यधिक समान वृद्धि की आवश्यकता होती है, तो आप कल्चर फ्लास्क को छोटे संपर्क सतहों वाले धातु के समर्थन पर रख सकते हैं, जो आमतौर पर नियमित सेल कल्चर में आवश्यक नहीं होते हैं।
सेल प्रसंस्करण समय को न्यूनतम करना
कोशिका उपचार प्रक्रिया में लगने वाले समय को न्यूनतम करने के लिए, आपको निम्न करने की आवश्यकता है:
- ▶काम शुरू करने से पहले सभी आवश्यक सामग्री और उपकरण व्यवस्थित करें।
- ▶प्रयोगात्मक तरीकों की अग्रिम समीक्षा करते हुए शीघ्रता और सुचारू रूप से कार्य करें ताकि आपके कार्य दोहरावपूर्ण और स्वचालित हो जाएं।
- ▶तरल पदार्थों का परिवेशी वायु के साथ संपर्क न्यूनतम रखें।
- ▶जिस सेल कल्चर लैब में आप काम करते हैं, वहां तापमान स्थिर बनाए रखें।
पोस्ट करने का समय: जनवरी-03-2024