कोशिका संवर्धन पर तापमान परिवर्तन का प्रभाव
कोशिका संवर्धन में तापमान एक महत्वपूर्ण पैरामीटर है क्योंकि यह परिणामों की पुनरुत्पादकता को प्रभावित करता है। 37°C से ऊपर या नीचे के तापमान में परिवर्तन स्तनधारी कोशिकाओं की कोशिका वृद्धि गतिकी पर जीवाणु कोशिकाओं के समान ही महत्वपूर्ण प्रभाव डालते हैं। 32ºC पर एक घंटे के बाद स्तनधारी कोशिकाओं में जीन अभिव्यक्ति में परिवर्तन और कोशिकीय संरचना, कोशिका चक्र प्रगति, mRNA स्थिरता में परिवर्तन देखे जा सकते हैं। कोशिका वृद्धि को सीधे प्रभावित करने के अलावा, तापमान में परिवर्तन माध्यम के pH को भी प्रभावित करते हैं, क्योंकि CO2 की घुलनशीलता pH को बदल देती है (कम तापमान पर pH बढ़ जाता है)। संवर्धित स्तनधारी कोशिकाएँ तापमान में उल्लेखनीय कमी को सहन कर सकती हैं। इन्हें 4°C पर कई दिनों तक संग्रहीत किया जा सकता है और ये -196°C तक (उपयुक्त परिस्थितियों में) जमने को सहन कर सकती हैं। हालाँकि, ये सामान्य से लगभग 2°C अधिक तापमान को कुछ घंटों से ज़्यादा सहन नहीं कर सकतीं और 40°C और उससे अधिक तापमान पर जल्दी मर जाएँगी। परिणामों की अधिकतम पुनरुत्पादकता सुनिश्चित करने के लिए, भले ही कोशिकाएं जीवित रहें, इनक्यूबेटर के बाहर कोशिकाओं के ऊष्मायन और संचालन के दौरान तापमान को यथासंभव स्थिर बनाए रखने के लिए सावधानी बरतने की आवश्यकता होती है।
इनक्यूबेटर के अंदर तापमान में बदलाव के कारण
आपने देखा होगा कि जब इनक्यूबेटर का दरवाज़ा खोला जाता है, तो तापमान तेज़ी से 37°C के निर्धारित मान तक गिर जाता है। आमतौर पर, दरवाज़ा बंद होने के कुछ ही मिनटों बाद तापमान सामान्य हो जाता है। दरअसल, स्थिर कल्चर को इनक्यूबेटर में निर्धारित तापमान तक पहुँचने में समय लगता है। इनक्यूबेटर के बाहर उपचार के बाद सेल कल्चर को तापमान पुनः प्राप्त करने में लगने वाले समय को कई कारक प्रभावित कर सकते हैं। इन कारकों में शामिल हैं:
- ▶कोशिकाओं के इनक्यूबेटर से बाहर रहने की अवधि
- ▶फ्लास्क का प्रकार जिसमें कोशिकाएँ उगाई जाती हैं (ज्यामिति ऊष्मा स्थानांतरण को प्रभावित करती है)
- ▶इनक्यूबेटर में कंटेनरों की संख्या.
- ▶ स्टील शेल्फ के साथ फ्लास्क का सीधा संपर्क गर्मी विनिमय और इष्टतम तापमान तक पहुंचने की गति को प्रभावित करता है, इसलिए फ्लास्क के ढेर से बचना और प्रत्येक बर्तन को रखना बेहतर है
- ▶सीधे इनक्यूबेटर के शेल्फ पर।
किसी भी नए कंटेनर और मीडिया का प्रारंभिक तापमान भी कोशिकाओं को उनकी इष्टतम स्थिति में आने में लगने वाले समय को प्रभावित करेगा; उनका तापमान जितना कम होगा, उतना ही अधिक समय लगेगा।
यदि ये सभी कारक समय के साथ बदलते हैं, तो प्रयोगों के बीच परिवर्तनशीलता भी बढ़ेगी। इन तापमान में उतार-चढ़ाव को कम करना आवश्यक है, भले ही हर चीज़ को नियंत्रित करना हमेशा संभव न हो (खासकर यदि कई लोग एक ही इनक्यूबेटर का उपयोग कर रहे हों)।
तापमान में बदलाव को कैसे कम करें और तापमान पुनर्प्राप्ति समय को कैसे कम करें
माध्यम को पहले से गरम करके
कुछ शोधकर्ता उपयोग से पहले माध्यम की पूरी बोतलों को 37°C के पानी के बाथटब में पहले से गर्म करके इस तापमान पर लाने के आदी हैं। माध्यम को ऐसे इनक्यूबेटर में भी पहले से गर्म करना संभव है जिसका उपयोग केवल माध्यम को गर्म करने के लिए किया जाता है, कोशिका संवर्धन के लिए नहीं, जहाँ माध्यम किसी अन्य इनक्यूबेटर में कोशिका संवर्धन को प्रभावित किए बिना इष्टतम तापमान तक पहुँच सकता है। लेकिन जहाँ तक हम जानते हैं, यह आमतौर पर एक किफायती खर्च नहीं होता है।
इनक्यूबेटर के अंदर
इनक्यूबेटर का दरवाज़ा जितना हो सके कम खोलें और जितनी जल्दी हो सके बंद कर दें। ठंडी जगहों से बचें, जो इनक्यूबेटर में तापमान में अंतर पैदा करती हैं। फ्लास्क के बीच जगह छोड़ें ताकि हवा का संचार हो सके। इनक्यूबेटर के अंदर की अलमारियों में छेद किए जा सकते हैं। इससे गर्मी का बेहतर वितरण होता है क्योंकि यह छिद्रों से हवा को गुजरने देता है। हालाँकि, छिद्रों की उपस्थिति कोशिका वृद्धि में अंतर ला सकती है, क्योंकि छिद्रों वाले क्षेत्र और मेटा वाले क्षेत्र के बीच तापमान में अंतर होता है। इन कारणों से, यदि आपके प्रयोगों में कोशिका संवर्धन की अत्यधिक समान वृद्धि की आवश्यकता है, तो आप संवर्धन फ्लास्क को छोटे संपर्क सतहों वाले धातु के आधारों पर रख सकते हैं, जो आमतौर पर नियमित कोशिका संवर्धन में आवश्यक नहीं होते हैं।
सेल प्रसंस्करण समय को न्यूनतम करना
कोशिका उपचार प्रक्रिया में लगने वाले समय को न्यूनतम करने के लिए, आपको निम्न कार्य करने होंगे:
- ▶काम शुरू करने से पहले सभी आवश्यक सामग्री और उपकरण व्यवस्थित करें।
- ▶ शीघ्रता और सुचारू रूप से कार्य करें, प्रयोगात्मक विधियों की पहले से समीक्षा करें ताकि आपके कार्य दोहरावपूर्ण और स्वचालित हो जाएं।
- ▶तरल पदार्थों का परिवेशी वायु के साथ संपर्क न्यूनतम रखें।
- ▶आप जिस सेल कल्चर लैब में काम करते हैं, वहां तापमान स्थिर बनाए रखें।
पोस्ट करने का समय: 03 जनवरी 2024