中文
Wpływ zmienności temperatury na hodowlę komórkową
Temperatura jest ważnym parametrem w hodowli komórkowej, ponieważ wpływa na odtwarzalność wyników. Zmiany temperatury powyżej lub poniżej 37 ° C mają bardzo znaczący wpływ na kinetykę wzrostu komórek komórek ssaków, podobnie jak zmiany komórek bakteryjnych. Zmiany w ekspresji genów i modyfikacjach w strukturze komórkowej postępu cyklu komórkowego, stabilność mRNA można wykryć w komórkach ssaków po godzinie 32ºC. Oprócz bezpośredniego wpływu na wzrost komórek, zmiany temperatury wpływają również na pH pożywki, ponieważ rozpuszczalność CO2 zmienia pH (pH wzrasta w niższych temperaturach). Hodowane komórki ssaków mogą tolerować znaczny spadek temperatury. Można je przechowywać w 4 ° C przez kilka dni i mogą tolerować zamarzanie do -196 ° C (przy użyciu odpowiednich warunków). Nie mogą jednak tolerować temperatur powyżej około 2 ° C powyżej normy dłużej niż kilka godzin i umrą szybko w 40 ° C i powyżej. Aby zapewnić maksymalną odtwarzalność wyników, nawet jeśli komórki przeżyją, należy zachować ostrożność, aby utrzymać temperaturę tak stałą, jak to możliwe podczas inkubacji i obsługi komórek poza inkubatorem.
Przyczyny zmian temperatury wewnątrz inkubatora
Zauważyłeś, że po otwarciu drzwi inkubatora temperatura gwałtownie spada do ustalonej wartości 37 ° C. Ogólnie rzecz biorąc, temperatura odzyska w ciągu kilku minut po zamknięciu drzwi. W rzeczywistości kultury statyczne potrzebują czasu na odzyskanie ustalonej temperatury w inkubatorze. Wiele czynników może wpłynąć na czas potrzebny na odzyskanie temperatury po leczeniu poza inkubatorem. Te czynniki obejmują ：
- ▶ Czas, w którym komórki wyszły z inkubatora
- ▶ Rodzaj kolby, w której hodowane są komórki (geometria wpływa na transfer ciepła)
- ▶ Liczba pojemników w inkubatorze.
- ▶ Bezpośredni kontakt kolb ze stalową półką wpływa na wymianę ciepła i prędkość osiągnięcia optymalnej temperatury, więc lepiej jest unikać stosów kolb i umieszczenie każdego statku
- ▶ Bezpośrednio na półce inkubatora.
Początkowa temperatura wszelkich użytych świeżych pojemników i mediów wpłynie również na czas potrzebny, aby komórki były w ich optymalnym stanie; Im niższa ich temperatura, tym dłużej.
Jeśli wszystkie te czynniki zmienią się w czasie, zwiększą również zmienność między eksperymentami. Konieczne jest zminimalizowanie tych fluktuacji temperatury, nawet jeśli nie zawsze jest możliwe kontrolowanie wszystkiego (szczególnie jeśli kilka osób używa tego samego inkubatora).
Jak zminimalizować zmiany temperatury i skrócić czas odzyskiwania temperatury
Rozgrzewając medium
Niektórzy badacze są przyzwyczajeni do wstępnego rozwój całych butelek medialnych w łaźni wodnej o 37 ° C, aby doprowadzić je do tej temperatury przed użyciem. Możliwe jest również podgrzewanie pożywki w inkubatorze, który jest stosowany wyłącznie do podgrzewania pożywki, a nie do hodowli komórkowej, gdzie pożywka może osiągnąć optymalną temperaturę bez zakłócania hodowli komórkowych w innym inkubatorze. Ale, o ile wiemy, zwykle nie jest to niedrogi koszt.
Wewnątrz inkubatora
Otwórz drzwi inkubatora tak mało, jak to możliwe i zamknij je tak szybko. Unikaj zimnych punktów, które powodują różnice temperatury w inkubatorze. Pozostaw przestrzeń między kolbami, aby umożliwić krążenie powietrza. Półki wewnątrz inkubatora można perforować. Umożliwia to lepszy rozkład ciepła, ponieważ pozwala przechodzić powietrze przez otwory. Jednak obecność otworów może prowadzić do różnic wzrostu komórek, ponieważ istnieje różnica temperatury między obszarem z otworami a obszarem z meta. Z tych powodów, jeśli twoje eksperymenty wymagają wysoce jednolitego wzrostu hodowli komórkowej, możesz umieścić kolby hodowlane na podporach metali z mniejszymi powierzchniami kontaktowymi, które zwykle nie są konieczne w rutynowej hodowli komórkowej.
Minimalizacja czasu przetwarzania komórek
Aby zminimalizować czas spędzony w procesie leczenia komórek, musisz
- ▶ Zanim zaczniesz zorganizować wszystkie niezbędne materiały i narzędzia.
- ▶ Pracuj szybko i płynnie, z wyprzedzeniem przeglądając metody eksperymentalne, aby Twoje operacje stały się powtarzalne i zautomatyzowane.
- ▶ Minimalizuj kontakt cieczy z powietrzem otoczenia.
- ▶ Utrzymuj stałą temperaturę w laboratorium kultury komórkowej, w którym pracujesz.
Czas po: 03-2024