中文
Vplyv variácie teploty na bunkovú kultúru
Teplota je dôležitým parametrom v bunkovej kultúre, pretože ovplyvňuje reprodukovateľnosť výsledkov. Zmeny teploty nad alebo pod 37 ° C majú veľmi významný vplyv na kinetiku bunkového rastu cicavčích buniek, podobne ako v bakteriálnych bunkách. Zmeny v génovej expresii a modifikáciách v bunkovej štruktúre, progresii bunkového cyklu, stabilita mRNA sa môžu detegovať v bunkách cicavcov po jednej hodine pri 32 ° C. Okrem priameho postihnutia bunkového rastu, zmeny teploty ovplyvňujú aj pH média, pretože rozpustnosť CO2 mení pH (pH sa zvyšuje pri nižších teplotách). Kultivované cicavčí bunky môžu tolerovať významné zníženie teploty. Môžu sa skladovať pri 4 ° C niekoľko dní a môžu tolerovať zmrazenie na -196 ° C (pomocou vhodných podmienok). Nemôžu však tolerovať teploty nad asi 2 ° C nad normálne dlhšie ako niekoľko hodín a rýchlo zomrú pri 40 ° C a viac. Aby sa zabezpečila maximálna reprodukovateľnosť výsledkov, aj keď bunky prežívajú, je potrebné venovať sa starostlivosti, aby sa udržala čo najspornejšia teplota počas inkubácie a manipulácie s bunkami mimo inkubátora.
Dôvody variácií teploty vo vnútri inkubátora
Budete si všimnúť, že keď sa dvere inkubátora otvoria, teplota rýchlo klesá na stanovenú hodnotu 37 ° C. Všeobecne sa teplota zotaví do niekoľkých minút po zatvorení dverí. V skutočnosti statické kultúry potrebujú čas na zotavenie sa na stanovenú teplotu v inkubátore. Mnohé faktory môžu ovplyvniť čas potrebný na to, aby sa bunková kultúra znovu získala teplotu po liečbe mimo inkubátora. Medzi tieto faktory patrí ：
- ▶ Dĺžka času, keď boli bunky mimo inkubátora
- ▶ Typ banky, v ktorej sa bunky pestujú (geometria ovplyvňuje prenos tepla)
- ▶ Počet nádob v inkubátore.
- ▶ Priamy kontakt boniek s oceľovou policou ovplyvňuje výmenu tepla a rýchlosť dosiahnutia optimálnej teploty, takže je lepšie vyhnúť sa stohom fity a umiestniť každú nádobu
- ▶ priamo na polici inkubátora.
Počiatočná teplota všetkých čerstvých nádob a použitých médií ovplyvní aj čas potrebný na to, aby bunky boli v ich optimálnom stave; Čím nižšia je ich teplota, tým dlhšie to trvá.
Ak sa všetky tieto faktory v priebehu času menia, zvýšia sa aj variabilita medzi experimentmi. Je potrebné minimalizovať tieto kolísanie teploty, aj keď nie je vždy možné kontrolovať všetko (najmä ak niekoľko ľudí používa rovnaký inkubátor).
Ako minimalizovať variácie teploty a skrátiť dobu regenerácie teploty
Predhrievaním média
Niektorí vedci sú zvyknutí predbehnúť celé fľaše médií vo vodnom kúpeli 37 ° C, aby ich pred použitím priviedli na túto teplotu. Je tiež možné predhrievať médium v inkubátore, ktoré sa používa iba na predhrievanie stredného a nie pre bunkovú kultúru, kde médium môže dosiahnuť optimálnu teplotu bez narušenia bunkových kultúr v inom inkubátore. Ale to, pokiaľ vieme, zvyčajne nie je cenovo dostupné náklady.
Vo vnútri inkubátora
Otvorte dvere inkubátora čo najmenej a zatvorte ich čo najrýchlejšie. Vyhnite sa studeným škvrnám, ktoré vytvárajú teplotné rozdiely v inkubátore. Nechajte priestor medzi bankami, aby ste mohli cirkulovať vzduch. Police vo vnútri inkubátora môžu byť perforované. To umožňuje lepšie rozloženie tepla, pretože umožňuje vzduchom prechádzať otvormi. Prítomnosť dier však môže viesť k rozdielom v bunkovom raste, pretože medzi oblasťami s otvormi a oblasťou s meta existuje teplotný rozdiel. Z týchto dôvodov, ak vaše experimenty vyžadujú vysoko rovnomerný rast bunkovej kultúry, môžete umiestniť kultivácie na kovové podpory s menšími kontaktnými povrchmi, ktoré zvyčajne nie sú potrebné v rutinnej bunkovej kultúre.
Minimalizácia času spracovania buniek
Aby ste minimalizovali čas strávenia v procese liečby buniek, musíte
- ▶ Predtým, ako začnete pracovať, usporiadajte všetky potrebné materiály a nástroje.
- ▶ Pracujte rýchlo a hladko a vopred preskúmajte experimentálne metódy, aby sa vaše operácie opakovali a automatizovali.
- ▶ Minimalizujte kontakt kvapalín s okolitým vzduchom.
- ▶ Udržujte konštantnú teplotu v laboratóriu bunkovej kultúry, kde pracujete.
Čas príspevku: Jan-03-2024