ผลของการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิต่อการเพาะเลี้ยงเซลล์

อุณหภูมิเป็นพารามิเตอร์ที่สำคัญในการเพาะเลี้ยงเซลล์เนื่องจากมีผลต่อการทำซ้ำของผลลัพธ์ การเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิสูงกว่าหรือต่ำกว่า 37 ° C มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญอย่างมากต่อจลนพลศาสตร์การเจริญเติบโตของเซลล์ของเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมซึ่งคล้ายกับเซลล์แบคทีเรีย การเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของยีนและการดัดแปลงในโครงสร้างเซลล์ความก้าวหน้าของวัฏจักรของเซลล์ความเสถียรของ mRNA สามารถตรวจพบในเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมหลังจากหนึ่งชั่วโมงที่32ºC นอกเหนือจากการส่งผลโดยตรงต่อการเจริญเติบโตของเซลล์แล้วการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิยังส่งผลกระทบต่อค่า pH ของสื่อเนื่องจากความสามารถในการละลายของ CO2 จะเปลี่ยนแปลงค่า pH (ค่า pH เพิ่มขึ้นที่อุณหภูมิที่ต่ำกว่า) เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่เพาะเลี้ยงสามารถทนต่ออุณหภูมิที่ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ สามารถเก็บไว้ที่ 4 ° C เป็นเวลาหลายวันและสามารถทนต่อการแช่แข็งได้ถึง -196 ° C (ใช้เงื่อนไขที่เหมาะสม) อย่างไรก็ตามพวกเขาไม่สามารถทนต่ออุณหภูมิสูงกว่าประมาณ 2 ° C สูงกว่าปกตินานกว่าสองสามชั่วโมงและจะตายอย่างรวดเร็วที่ 40 ° C ขึ้นไป เพื่อให้แน่ใจว่าการทำซ้ำสูงสุดของผลลัพธ์แม้ว่าเซลล์จะอยู่รอดได้จำเป็นต้องมีการดูแลเพื่อรักษาอุณหภูมิให้คงที่เท่าที่จะทำได้ในระหว่างการฟักตัวและการจัดการเซลล์นอกศูนย์บ่มเพาะ

เหตุผลสำหรับการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิภายในศูนย์บ่มเพาะ

คุณจะสังเกตเห็นว่าเมื่อเปิดประตูศูนย์บ่มเพาะอุณหภูมิจะลดลงอย่างรวดเร็วถึงค่าที่กำหนดไว้ที่ 37 ° C โดยทั่วไปอุณหภูมิจะฟื้นตัวภายในไม่กี่นาทีหลังจากปิดประตู ในความเป็นจริงวัฒนธรรมคงที่ต้องใช้เวลาในการกู้คืนอุณหภูมิที่ตั้งไว้ในตู้อบ ปัจจัยหลายประการอาจส่งผลกระทบต่อเวลาที่ใช้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์เพื่อฟื้นอุณหภูมิหลังการรักษานอกศูนย์บ่มเพาะปัจจัยเหล่านี้รวมถึง：：

▶ระยะเวลาที่เซลล์ออกจากศูนย์บ่มเพาะ
▶ชนิดของขวดที่เซลล์ปลูก (เรขาคณิตมีผลต่อการถ่ายเทความร้อน)
▶จำนวนคอนเทนเนอร์ในศูนย์บ่มเพาะ
▶การสัมผัสโดยตรงของขวดกับชั้นวางเหล็กส่งผลกระทบต่อการแลกเปลี่ยนความร้อนและความเร็วในการเข้าถึงอุณหภูมิที่เหมาะสมดังนั้นจึงเป็นการดีกว่าที่จะหลีกเลี่ยงกองขวดและวางเรือแต่ละลำ
▶โดยตรงบนชั้นวางของศูนย์บ่มเพาะ

อุณหภูมิเริ่มต้นของภาชนะบรรจุสดและสื่อที่ใช้จะส่งผลกระทบต่อเวลาที่เซลล์จะอยู่ในสถานะที่เหมาะสมที่สุด ยิ่งอุณหภูมิต่ำลงเท่าไหร่ก็ยิ่งใช้เวลานานขึ้นเท่านั้น

หากปัจจัยทั้งหมดเหล่านี้เปลี่ยนแปลงไปตามกาลเวลาพวกเขาจะเพิ่มความแปรปรวนระหว่างการทดลอง มีความจำเป็นที่จะต้องลดความผันผวนของอุณหภูมิเหล่านี้ให้น้อยที่สุดแม้ว่าจะไม่สามารถควบคุมทุกสิ่งได้เสมอไป (โดยเฉพาะอย่างยิ่งหากหลายคนใช้ศูนย์บ่มเพาะเดียวกัน)

วิธีลดความแปรปรวนของอุณหภูมิและลดเวลาในการกู้คืนอุณหภูมิ

โดยการอุ่นสื่อกลาง

นักวิจัยบางคนคุ้นเคยกับการอุ่นขวดทั้งขวดในอ่างน้ำ 37 ° C เพื่อนำพวกเขาไปที่อุณหภูมินี้ก่อนการใช้งาน นอกจากนี้ยังเป็นไปได้ที่จะเปิดสื่อกลางในศูนย์บ่มเพาะที่ใช้สำหรับการอุ่นอาหารกลางและไม่ใช่สำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ซึ่งสื่อสามารถเข้าถึงอุณหภูมิที่เหมาะสมโดยไม่รบกวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ในศูนย์บ่มเพาะอื่น แต่เท่าที่เรารู้มักจะไม่ใช่ค่าใช้จ่ายที่เหมาะสม

ภายในศูนย์บ่มเพาะ

เปิดประตูศูนย์บ่มเพาะให้น้อยที่สุดและปิดอย่างรวดเร็ว หลีกเลี่ยงจุดเย็นซึ่งสร้างความแตกต่างของอุณหภูมิในศูนย์บ่มเพาะ เว้นช่องว่างระหว่างขวดเพื่อให้อากาศไหลเวียน ชั้นวางภายในตู้อบสามารถเจาะรูได้ สิ่งนี้ช่วยให้การกระจายความร้อนดีขึ้นเนื่องจากช่วยให้อากาศผ่านรู อย่างไรก็ตามการปรากฏตัวของหลุมสามารถนำไปสู่ความแตกต่างของการเจริญเติบโตของเซลล์เนื่องจากมีความแตกต่างของอุณหภูมิระหว่างพื้นที่ที่มีรูและพื้นที่ที่มีเมตา For these reasons, if your experiments require highly uniform growth of the cell culture, you can place the culture flasks on metal supports with smaller contact surfaces, which are usually not necessary in routine cell culture.

ลดเวลาในการประมวลผลเซลล์

เพื่อลดเวลาที่ใช้ในกระบวนการรักษาเซลล์คุณต้องลด

▶จัดระเบียบวัสดุและเครื่องมือที่จำเป็นทั้งหมดก่อนที่จะเริ่มทำงาน
▶ทำงานได้อย่างรวดเร็วและราบรื่นตรวจสอบวิธีการทดลองล่วงหน้าเพื่อให้การดำเนินการของคุณซ้ำซากและอัตโนมัติ
▶ลดการสัมผัสของเหลวด้วยอากาศโดยรอบ
▶รักษาอุณหภูมิคงที่ในห้องปฏิบัติการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่คุณทำงาน

เวลาโพสต์: ม.ค.-03-2024

ข่าวและบล็อก

ผลของการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิต่อการเพาะเลี้ยงเซลล์