Epekto ng pagkakaiba-iba ng temperatura sa kultura ng cell
Ang temperatura ay isang mahalagang parameter sa kultura ng cell dahil nakakaapekto ito sa muling paggawa ng mga resulta. Ang mga pagbabago sa temperatura sa itaas o mas mababa sa 37°C ay may napakalaking epekto sa mga cell growth kinetics ng mammalian cells, katulad ng sa bacterial cells. Ang mga pagbabago sa expression ng gene at mga pagbabago sa istruktura ng cellular, pag-unlad ng cell cycle, katatagan ng mRNA ay maaaring makita sa mga mammalian cell pagkatapos ng isang oras sa 32ºC. Bilang karagdagan sa direktang nakakaapekto sa paglaki ng cell, ang mga pagbabago sa temperatura ay nakakaapekto rin sa pH ng media, dahil ang solubility ng CO2 ay nagbabago sa pH (pH tumataas sa mas mababang temperatura). Maaaring tiisin ng mga kulturang mammalian cell ang makabuluhang pagbaba ng temperatura. Maaari silang itago sa 4 °C sa loob ng ilang araw at kayang tiisin ang pagyeyelo hanggang -196 °C (gamit ang naaangkop na mga kondisyon). Gayunpaman, hindi nila matitiis ang mga temperaturang higit sa 2 °C sa itaas ng normal nang higit sa ilang oras at mabilis na mamamatay sa 40 °C pataas. Upang matiyak ang maximum na reproducibility ng mga resulta, kahit na mabuhay ang mga cell, kailangang mag-ingat upang mapanatili ang temperatura bilang pare-pareho hangga't maaari sa panahon ng pagpapapisa at paghawak ng mga cell sa labas ng incubator.
Mga dahilan para sa mga pagkakaiba-iba ng temperatura sa loob ng incubator
Mapapansin mo na kapag binuksan ang pinto ng incubator, mabilis na bumababa ang temperatura sa itinakdang halaga na 37 °C. Sa pangkalahatan, mababawi ang temperatura sa loob ng ilang minuto pagkatapos isara ang pinto. Sa katunayan, ang mga static na kultura ay nangangailangan ng oras upang mabawi sa itinakdang temperatura sa incubator. Ang ilang mga kadahilanan ay maaaring makaapekto sa oras na kinakailangan para sa isang cell culture upang mabawi ang temperatura pagkatapos ng paggamot sa labas ng incubator. Kabilang sa mga salik na ito ang:
- ▶ang tagal ng panahon na lumabas ang mga cell sa incubator
- ▶ang uri ng prasko kung saan lumalaki ang mga selula (naaapektuhan ng geometry ang paglipat ng init)
- ▶Bilang ng mga lalagyan sa incubator .
- ▶ Ang direktang pagdikit ng mga flasks sa bakal na istante ay nakakaapekto sa pagpapalitan ng init at ang bilis ng pag-abot sa pinakamainam na temperatura, kaya mas mabuting iwasan ang mga stack ng flasks at ilagay ang bawat sisidlan
- ▶ direkta sa istante ng incubator.
Ang paunang temperatura ng anumang sariwang lalagyan at media na ginamit ay makakaapekto rin sa oras na aabutin para ang mga cell ay nasa kanilang pinakamainam na estado; mas mababa ang kanilang temperatura, mas matagal ito.
Kung magbabago ang lahat ng salik na ito sa paglipas ng panahon, tataas din ng mga ito ang pagkakaiba-iba sa pagitan ng mga eksperimento. Kinakailangan na mabawasan ang mga pagbabago sa temperatura na ito, kahit na hindi laging posible na kontrolin ang lahat (lalo na kung maraming tao ang gumagamit ng parehong incubator).
Paano bawasan ang mga pagkakaiba-iba ng temperatura at bawasan ang oras ng pagbawi ng temperatura
Sa pamamagitan ng preheating ng medium
Ang ilang mga mananaliksik ay nakasanayan na na paunang magpainit ng buong bote ng media sa isang 37 °C na paliguan ng tubig upang dalhin ang mga ito sa ganitong temperatura bago gamitin. Posible rin na painitin ang medium sa isang incubator na ginagamit lamang para sa medium preheating at hindi para sa cell culture, kung saan ang medium ay maaaring maabot ang pinakamainam na temperatura nang hindi nakakagambala sa mga cell culture sa isa pang incubator. Ngunit ito, sa pagkakaalam natin, ay karaniwang hindi isang abot-kayang gastos.
Sa loob ng Incubator
Buksan ang pinto ng incubator nang kaunti hangga't maaari at isara ito nang mabilis. Iwasan ang malamig na mga spot, na lumilikha ng mga pagkakaiba sa temperatura sa incubator. Mag-iwan ng espasyo sa pagitan ng mga flasks upang payagan ang hangin na umikot. Ang mga istante sa loob ng incubator ay maaaring butas-butas. Ito ay nagbibigay-daan para sa mas mahusay na pamamahagi ng init dahil pinapayagan nito ang hangin na dumaan sa mga butas. Gayunpaman, ang pagkakaroon ng mga butas ay maaaring humantong sa mga pagkakaiba sa paglaki ng cell, dahil mayroong pagkakaiba sa temperatura sa pagitan ng lugar na may mga butas at ang lugar na may meta. Para sa mga kadahilanang ito, kung ang iyong mga eksperimento ay nangangailangan ng lubos na pare-parehong paglaki ng cell culture, maaari mong ilagay ang mga culture flasks sa mga metal support na may mas maliliit na contact surface, na kadalasang hindi kinakailangan sa regular na cell culture.
Pagbabawas ng Oras ng Pagproseso ng Cell
Upang mabawasan ang oras na ginugugol sa proseso ng cell treatment, kailangan mong
- ▶Ayusin ang lahat ng kinakailangang materyales at kasangkapan bago ka magsimulang magtrabaho.
- ▶Magtrabaho nang mabilis at maayos, suriin nang maaga ang mga eksperimentong pamamaraan upang ang iyong mga operasyon ay maging paulit-ulit at awtomatiko.
- ▶I-minimize ang contact ng mga likido na may nakapaligid na hangin.
- ▶Panatilihin ang pare-parehong temperatura sa cell culture lab kung saan ka nagtatrabaho.
Oras ng post: Ene-03-2024