Efecto da variación da temperatura no cultivo celular
A temperatura é un parámetro importante no cultivo celular porque afecta á reproducibilidade dos resultados. Os cambios de temperatura por riba ou por debaixo dos 37 °C teñen un efecto moi significativo na cinética de crecemento celular das células de mamíferos, de xeito similar ao das células bacterianas. Os cambios na expresión xénica e as modificacións na estrutura celular, a progresión do ciclo celular e a estabilidade do ARNm pódense detectar en células de mamíferos despois dunha hora a 32 °C. Ademais de afectar directamente o crecemento celular, os cambios de temperatura tamén afectan o pH do medio, xa que a solubilidade do CO2 altera o pH (o pH aumenta a temperaturas máis baixas). As células de mamíferos cultivadas poden tolerar descensos significativos da temperatura. Pódense almacenar a 4 °C durante varios días e poden tolerar a conxelación a -196 °C (usando as condicións axeitadas). Non obstante, non poden tolerar temperaturas superiores a uns 2 °C por riba do normal durante máis dunhas poucas horas e morrerán rapidamente a 40 °C e superiores. Para garantir a máxima reproducibilidade dos resultados, mesmo se as células sobreviven, débese ter coidado de manter a temperatura o máis constante posible durante a incubación e a manipulación das células fóra da incubadora.
Razóns das variacións de temperatura dentro da incubadora
Notarás que, ao abrir a porta da incubadora, a temperatura baixa rapidamente ata o valor establecido de 37 °C. En xeral, a temperatura recupérase en poucos minutos despois de pechar a porta. De feito, os cultivos estáticos necesitan tempo para recuperar a temperatura establecida na incubadora. Varios factores poden afectar o tempo que tarda un cultivo celular en recuperar a temperatura despois do tratamento fóra da incubadora. Estes factores inclúen:
- ▶ o tempo que as células estiveron fóra da incubadora
- ▶o tipo de matraz no que se cultivan as células (a xeometría afecta á transferencia de calor)
- ▶Número de recipientes na incubadora.
- ▶O contacto directo dos frascos coa balda de aceiro afecta á intercambio de calor e á velocidade para alcanzar a temperatura óptima, polo que é mellor evitar apilamentos de frascos e colocar cada recipiente
- ▶Directamente na balda da incubadora.
A temperatura inicial de calquera recipiente e medio fresco empregado tamén afectará o tempo que tardan as células en alcanzar o seu estado óptimo; canto menor sexa a súa temperatura, máis tempo tardarán.
Se todos estes factores cambian co tempo, tamén aumentarán a variabilidade entre os experimentos. É necesario minimizar estas flutuacións de temperatura, mesmo que non sempre sexa posible controlalo todo (especialmente se varias persoas usan a mesma incubadora).
Como minimizar as variacións de temperatura e reducir o tempo de recuperación da temperatura
Ao prequecer o medio
Algúns investigadores están afeitos a prequecer botellas enteiras de medio nun baño de auga a 37 °C para levalas a esta temperatura antes do seu uso. Tamén é posible prequecer o medio nunha incubadora que só se usa para o prequecemento do medio e non para o cultivo celular, onde o medio pode alcanzar unha temperatura óptima sen perturbar os cultivos celulares noutra incubadora. Pero isto, polo que sabemos, non adoita ser un gasto accesible.
Dentro da incubadora
Abra a porta da incubadora o menos posible e péchea o máis rápido posible. Evite os puntos fríos, que crean diferenzas de temperatura na incubadora. Deixe espazo entre os frascos para permitir que o aire circule. As baldas do interior da incubadora poden ser perforadas. Isto permite unha mellor distribución da calor xa que permite que o aire pase polos orificios. Non obstante, a presenza de orificios pode provocar diferenzas no crecemento celular, porque hai unha diferenza de temperatura entre a zona con orificios e a zona con meta. Por estas razóns, se os seus experimentos requiren un crecemento moi uniforme do cultivo celular, pode colocar os frascos de cultivo en soportes metálicos con superficies de contacto máis pequenas, que non adoitan ser necesarias no cultivo celular de rutina.
Minimizar o tempo de procesamento celular
Para minimizar o tempo dedicado ao proceso de tratamento celular, cómpre
- ▶ Organiza todos os materiais e ferramentas necesarios antes de comezar a traballar.
- ▶Traballa con rapidez e fluidez, revisando os métodos experimentais con antelación para que as túas operacións se volvan repetitivas e automaticen.
- ▶Minimizar o contacto dos líquidos co aire ambiente.
- ▶Manteña unha temperatura constante no laboratorio de cultivo celular onde traballe.
Data de publicación: 03-01-2024