Vpliv temperaturnih sprememb na celično kulturo
Temperatura je pomemben parameter v celičnih kulturah, saj vpliva na ponovljivost rezultatov. Spremembe temperature nad ali pod 37 °C imajo zelo pomemben vpliv na kinetiko rasti celic sesalcev, podobno kot pri bakterijskih celicah. Spremembe v izražanju genov in modifikacije v celični strukturi, napredovanju celičnega cikla in stabilnosti mRNA je mogoče zaznati v celicah sesalcev po eni uri pri 32 °C. Poleg neposrednega vpliva na rast celic spremembe temperature vplivajo tudi na pH gojišča, saj topnost CO2 spremeni pH (pH se pri nižjih temperaturah poveča). Gojene celice sesalcev lahko prenesejo znatno znižanje temperature. Lahko jih shranjujemo pri 4 °C več dni in lahko prenesejo zmrzovanje na -196 °C (ob ustreznih pogojih). Vendar pa ne morejo prenašati temperatur nad približno 2 °C nad normalno več kot nekaj ur in bodo hitro umrle pri 40 °C in več. Da bi zagotovili maksimalno ponovljivost rezultatov, je treba paziti, da se temperatura med inkubacijo in ravnanjem s celicami zunaj inkubatorja ohranja čim bolj konstantna.
Razlogi za temperaturne spremembe v inkubatorju
Opazili ste, da se ob odprtju vrat inkubatorja temperatura hitro zniža na nastavljeno vrednost 37 °C. Na splošno se temperatura po zaprtju vrat povrne v nekaj minutah. Pravzaprav statične kulture potrebujejo čas, da se v inkubatorju povrnejo na nastavljeno temperaturo. Na čas, ki ga celična kultura potrebuje, da se po obdelavi zunaj inkubatorja ponovno ogreje, lahko vpliva več dejavnikov. Ti dejavniki vključujejo:
- ▶čas, ko so bile celice zunaj inkubatorja
- ▶vrsta bučke, v kateri gojimo celice (geometrija vpliva na prenos toplote)
- ▶Število posod v inkubatorju.
- ▶Neposreden stik bučk z jekleno polico vpliva na izmenjavo toplote in hitrost doseganja optimalne temperature, zato se je bolje izogibati zlaganju bučk in vsako posodo postaviti
- ▶neposredno na polico inkubatorja.
Začetna temperatura vseh svežih posod in uporabljenih medijev bo vplivala tudi na čas, ki je potreben, da celice dosežejo optimalno stanje; nižja kot je njihova temperatura, dlje traja.
Če se vsi ti dejavniki sčasoma spremenijo, se bo povečala tudi variabilnost med poskusi. Ta temperaturna nihanja je treba čim bolj zmanjšati, tudi če ni vedno mogoče nadzorovati vsega (še posebej, če isti inkubator uporablja več ljudi).
Kako zmanjšati temperaturne spremembe in skrajšati čas okrevanja po temperaturi
S predgrevanjem medija
Nekateri raziskovalci so vajeni predhodno segreti cele steklenice gojišča v vodni kopeli s temperaturo 37 °C, da jih pred uporabo segrejejo na to temperaturo. Gojišče je mogoče predhodno segreti tudi v inkubatorju, ki se uporablja samo za predgrevanje gojišča in ne za celične kulture, kjer lahko medij doseže optimalno temperaturo, ne da bi pri tem motil celične kulture v drugem inkubatorju. Vendar pa si to, kolikor vemo, običajno ni dostopen strošek.
V inkubatorju
Vrata inkubatorja odpirajte čim manjkrat in jih čim hitreje zapirajte. Izogibajte se hladnim mestom, ki povzročajo temperaturne razlike v inkubatorju. Med bučkami pustite prostor, da lahko zrak kroži. Police v inkubatorju so lahko perforirane. To omogoča boljšo porazdelitev toplote, saj omogoča prehajanje zraka skozi luknje. Vendar pa lahko prisotnost lukenj povzroči razlike v rasti celic, ker obstaja temperaturna razlika med območjem z luknjami in območjem z meta. Zaradi teh razlogov lahko bučke za gojenje postavite na kovinske nosilce z manjšimi kontaktnimi površinami, ki običajno niso potrebne pri rutinskih celičnih kulturah.
Zmanjšanje časa obdelave celic
Da bi čim bolj skrajšali čas, porabljen za postopek celične obdelave, morate
- ▶Pred začetkom dela pripravite vse potrebne materiale in orodja.
- ▶Delajte hitro in gladko ter vnaprej pregledajte eksperimentalne metode, da bodo vaše operacije postale ponavljajoče se in avtomatizirane.
- ▶ Zmanjšajte stik tekočin z okoliškim zrakom.
- ▶V laboratoriju za celične kulture, kjer delate, vzdržujte konstantno temperaturo.
Čas objave: 3. januar 2024